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正文:

顯微鏡下去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁然后觀察此圓球形的原生質(zhì)體

本文亦介紹細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)殖的概念

本文章是讓學(xué)生利用酵素去除植物細(xì)胞的細(xì)胞壁，然后觀察此圓球形的原生質(zhì)體（即植物細(xì)胞去除細(xì)胞壁），
學(xué)生可看到去除細(xì)胞壁后，植物的細(xì)胞的確有細(xì)胞膜存在。

另外，本文亦介紹''細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)殖''的概念。也就是，將外來(lái)的DNA插入細(xì)胞內(nèi)。已被轉(zhuǎn)殖的細(xì)胞有細(xì)菌、酵母菌、動(dòng)物細(xì)胞以及植物細(xì)胞。不論轉(zhuǎn)殖任何形式的細(xì)胞，細(xì)胞膜以及細(xì)胞壁或兩者其中之一，必定要被穿透，然而卻不能破壞到細(xì)胞。因此各種的技術(shù)被發(fā)展用來(lái)轉(zhuǎn)殖不同形式的細(xì)胞，且大部份這些技術(shù)的機(jī)制，仍不是完全被了解的。一些植物可藉由Agrobacterium tumefaciens做為載體來(lái)轉(zhuǎn)殖。然而，并非所有植物都能如此做，因此直接將DNA轉(zhuǎn)殖是另一個(gè)方法。

以植物為例來(lái)說(shuō)，在將DNA直接穿透細(xì)胞膜之前，首先決定性的步驟是先要移除其細(xì)胞壁。因此當(dāng)分子生物學(xué)家準(zhǔn)備要被轉(zhuǎn)殖的各種形式植物，尤其是茄屬植物（Solanacea）時(shí)，會(huì)先分離其原生質(zhì)體。原生質(zhì)體產(chǎn)生后，便可使用電破法（electroporation）或PEG法（polyethylene glycol）將DNA穿透進(jìn)入細(xì)胞膜。至于DNA的微注射法（microinjection）則較少用。原生質(zhì)體也可以用來(lái)做''原生質(zhì)體融合''以產(chǎn)生溷種（hybride），但很少成功。來(lái)自不同種間，分別處理過(guò)的原生質(zhì)體，可融合在一起，而可應(yīng)用在細(xì)胞的雜交。【注：目前藻類的溷種十分地成功】

下列簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)是讓學(xué)生制備原生質(zhì)體以便觀察，然而原生質(zhì)體也可用來(lái)做真正的轉(zhuǎn)殖或癒合組織的誘導(dǎo)及組織誘導(dǎo)的計(jì)劃。但這些計(jì)劃的步驟不包括在這篇文章中。

學(xué)習(xí)對(duì)象：

植物生物學(xué)的介紹

需要花費(fèi)的時(shí)間：

兩天，每天30分鐘（作為原生質(zhì)體的制備和觀察用）。額外的活動(dòng)、討論、應(yīng)用則將需要花更多的時(shí)間。

消耗性材料：

    * 新鮮的波菜葉（spinach）、煙草（Nicotiana rustica）、或喇叭花的葉子（petunia leaf）、或大型綠藻（Green Macroalgae）【注：藻類原生質(zhì)體制備，其滲透壓稍有不同】

    * 培養(yǎng)皿（一組一個(gè)）

    * parafilm或膠帶，用來(lái)封住培養(yǎng)皿

設(shè)備：

    * 鑷子（一組一對(duì)）

    * 針或大頭針（一組兩支）

    * 15毫升試管或小體積的燒杯

    * 有刻度的量筒（50ml）（全班幾支）

    * 解剖顯微鏡或光學(xué)顯微鏡

    * 寬口的微量吸管（10ml）及安全吸球

    * 載玻片和一般的蓋玻片--剪刀用來(lái)將葉子切成正方

化學(xué)藥品：

    * 緩沖溶液（每組10ml）

    * 甘露醣醇（mannitol），作為緩沖溶液用

    * 軟化酵素（macerase）（每組100mg）

    * 纖維酵素（cellulysin）（每組200mg）

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科