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免疫電子顯微鏡技術(shù)中ELISA技術(shù)可偵測每一種植物病毒

本試驗(yàn)利用橙綠蛋白質(zhì)染劑染色法 (光學(xué)顯微鏡觀察)、陰染及超薄切片法 (電子顯微鏡觀察 ) 及血清學(xué)方法(酵素聯(lián)結(jié)免疫分析法、組織轉(zhuǎn)漬法及西方轉(zhuǎn)漬法 )
均能偵測到罹病組織內(nèi)之 L N V，且反應(yīng)明確。就實(shí)際應(yīng)用而言，使用酵素聯(lián)結(jié)免疫分析法 (ELISA) 較為迅速又可同時(shí)偵測較多之樣本，但為保證鑒定之品質(zhì)，經(jīng) E L I S A 初步診斷之結(jié)果必要時(shí)得再藉由電子顯微鏡直接觀察罹病組織或其他的偵測方法加予佐證，其結(jié)果可信度會(huì)更高。血清學(xué)方法如 ELISA、dot-blot immunoassy 及免疫電子顯微鏡(ISEM) 等技術(shù)被廣泛應(yīng)用于植物病毒診斷其中 E L I S A 幾乎可偵測每一種植物病毒

LNV 鞘蛋白 (38 kDa) 做為抗原制備兔子抗血清或以 LNV老鼠單元抗體應(yīng)用于 ELISA, Western blot, direct tissue blot
( D T B ) 及 I S E M (5) 均能有效偵測到罹病組織內(nèi)之 L N V 抗
原，但由于老鼠單元抗體可以不斷地培養(yǎng)供應(yīng)，在實(shí)際應(yīng)用上更計(jì)具有價(jià)值。

LNV 機(jī)械接種于洋桔梗后，以 DTB 偵測結(jié)果顯示在

高溫 ( 2 6℃) 情況下接種比低溫 ( 2 1℃) 病斑多且病斑較大，此可能說明在高溫時(shí)，病毒複制較快且複制之量較多。在 2 6℃，機(jī)械接種 L N V 于洋桔梗，以 i n d i r e c t

ELISA 及 DTB 比較其偵測 LNV 之效率，結(jié)果 DTB 于接種后 12 小時(shí)即能偵測到新複制之病毒，而 indirect ELISA 則于接種后 48 小時(shí)始能明確偵測到病毒 ，顯然 DTB

能較早偵測到病毒。ELISA 雖具有前述之優(yōu)點(diǎn)，但它仍受

限于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，而 D T B 則不受此項(xiàng)限制，它可于田間或苗圃立即取樣并進(jìn)行檢測，由于其能較早期偵測到病毒且操作簡便，對于抗病毒育種選拔、大量健康種苗生產(chǎn)之

早期發(fā)現(xiàn)病毒，在種苗管理上確具有發(fā)展之潛力及實(shí)用之價(jià)值。