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正文:

熒光顯微鏡熒光法染色及觀察花柱中花粉管
1. 剪下花柱或整朵小花以Carnoy’s solution固定24小時(shí)以上。
2. 材料充分水洗后，以8 N NaOH進(jìn)行組織透化及軟化處理，時(shí)間隨材料性質(zhì)不一，如欲加速作用，可置于烘箱中促進(jìn)之。
3. 水洗除去大部分的NaOH。
4. 以0.1％aniline blue in 0.1 M K3PO4染色4小時(shí)。
5. 材料取出放在載玻片上，加幾滴染液，蓋上蓋玻片，輕壓展平。
6. 熒光顯微鏡觀察。
7. 如欲暫時(shí)保存，可用臘或透明指甲油將蓋玻片四周封住，室溫下可置放幾天。冰箱低溫下（4-5℃）則可保存1-2個(gè)月不變質(zhì)。
＃材料固定時(shí)，可將整個(gè)花（剝?nèi)セü冢┕潭ā５珵橐院筌浕�及觀察方便，水洗除去固定液后，可先行以解剖刀及解剖針在解剖顯微鏡下將花剝開，僅挑出雌蕊部份進(jìn)行軟化。子房如過大也需剔除胚珠的大部份覆蓋組織，以利以后花粉管伸入胚珠之觀察。
＃0.1％aniline blue in 0.1 M K3PO4染劑配制方法：
先配制0.1 N K3PO4再緩緩加入0.1％的量的aniline blue粉末，K3PO4溶液為堿性，aniline blue會(huì)由深藍(lán)色變成透明的無色或澹黃色的溶液，所以必需將染劑攪拌至溶液透明，約需時(shí)30分鐘以上。
花粉管觀察使用藥品之配制
1. 配制Carnoy’s固定液。
2. 配制8 N NaOH。
3. 配制1％aniline blue in 0.1 M K3PO4。
4. 熒光顯微鏡。
＃Carnoy’s fixative
95％ or 100％EtOH    6 ml
chloroform            3 ml
acetic acid            1 ml
滲透力強(qiáng)，固定快速，故而固定之時(shí)間不宜太長，花粉約10-60分鐘。
＃0.1％aniline blue in 0.1 M K3PO4
1. Prepared 0.1 M K3PO4 soln’.
2. Add aniline blue powder slowly.
3. Until the aniline blue turn colorless.（at least 30 mins）
＃Safranin
1. Add 2.25 g Safranin to 225 ml 95％EtOH.
2. Dilute with an equal volum of dist. water when needed.
花柱中花粉管之熒光法染色及觀察
上課前準(zhǔn)備器材及消耗品
植物材料：醡醬草花
Carnoy固定液（醋酸：95％酒精=1：3）
蠟或透明指甲油
8N NaOH
0.1％ aniline blue in 0.1M K3PO4 熒光染劑
明視野顯微鏡*1
解剖顯微鏡*1
熒光顯微鏡*1

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科