標(biāo)題：細(xì)胞繼代培養(yǎng)實驗步驟！利用顯微鏡觀察細(xì)胞
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2011-12-25 20:05:03
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正文:
細(xì)胞繼代培養(yǎng)實驗步驟！利用顯微鏡觀察細(xì)胞
細(xì)胞繼代培養(yǎng)實驗?zāi)康模?/p>
細(xì)胞生長到高密度時，把細(xì)胞收集起來，分殖在新的培養(yǎng)盤中，讓細(xì)胞有更多而足夠的空間繼續(xù)生長。
實驗步驟：
1.從冰箱中取出要用到的材料，并利用37℃水浴槽回溫。
2.關(guān)閉無菌操作臺UV燈，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇及日光燈。噴酒精于無菌操作臺平面，并擦拭乾淨(jìng)，以達(dá)到消毒效果。
3.將要使用到的物品，噴酒精消毒，并擦拭乾淨(jìng)，再帶入無菌操作臺內(nèi)。
4.將細(xì)胞，噴酒精消毒，并擦拭乾淨(jìng)，再帶入無菌操作臺內(nèi)。
5.將玻璃吸管接再pump的塑膠吸管上。
6.去除細(xì)胞培養(yǎng)液，再加入PBS清洗細(xì)胞，并來回輕輕搖擺幾次。
*15公分Dish，加入10ml PBS；9公分Dish，加入5ml PBS。
7.去除PBS，再加入Trypsin。
*15公分Dish，加入5ml Trypsin；9公分Dish，加入3ml Trypsin。
8.放入細(xì)胞培養(yǎng)箱 (37℃) 3~5分鐘，以加速酵素作用，使附著型細(xì)胞漂浮起來。
9.輕輕拍打幾次，再利用顯微鏡觀察細(xì)胞是否全部漂浮起來。
10.噴酒精消毒，并擦拭乾淨(jìng)，再帶入無菌操作臺內(nèi)。
11.加入與Trypsin同樣體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，并來回輕輕搖擺幾次溷合，以綜合酵素，阻止酵素繼續(xù)反應(yīng)。
12.吸取細(xì)胞液放入離心管。
13.細(xì)胞液給予離心。 (轉(zhuǎn)速1000rpm，溫度20℃，5分鐘)
14.去除上清液，加入H9C2 medium。
15.利用微量吸管來回吸取，使細(xì)胞與H9C2 medium完全平均溷合，形成細(xì)胞懸浮液。
16.回種到Dish。
*15公分Dish，總體積25ml H9C2 medium；9公分Dish，總體積10ml H9C2 medium。
17.移至入細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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