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正文:
練習(xí)孢子染色法簡(jiǎn)介,菌種分類(lèi)鑒定用
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了解孢子染色法之化學(xué)基本理論并練習(xí)染色法。本法為現(xiàn)行菌種分類(lèi)鑒定之一。
厭氣性之梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium)與好氣性之桿菌屬(Bacillus),在正常情形下,
為代謝作用旺盛之生長(zhǎng)型細(xì)胞。當(dāng)環(huán)境條件不利于細(xì)胞之活動(dòng)時(shí),會(huì)形成具高度抵抗力而代謝停止之孢子。
此為嚴(yán)苛環(huán)境下,確保細(xì)胞存活之轉(zhuǎn)機(jī)。在此情況下,細(xì)胞經(jīng)芽胞形成作用產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)構(gòu)造即內(nèi)孢子(endospore),
而內(nèi)孢子會(huì)被緻密之孢子殼(spore coat)環(huán)繞。當(dāng)環(huán)境繼續(xù)惡化時(shí),內(nèi)孢子即自衰退
之生長(zhǎng)型細(xì)胞釋出而成獨(dú)立之孢子。孢子外層對(duì)各種不利影響如高熱、冷凍、放射線(xiàn)、干燥、化學(xué)藥品及染料等均具相當(dāng)之抵抗力。
當(dāng)環(huán)境條件變?yōu)橛欣麜r(shí),孢子可再經(jīng)萌芽恢復(fù)為代謝旺盛之生長(zhǎng)型細(xì)胞
原理
本法系以孔雀石綠(malachite green)為初染劑,因孢子殼不易吸收孔雀石綠,故需加熱來(lái)提高其滲透效率。
此步驟會(huì)將生長(zhǎng)型細(xì)胞與孢子都染成綠色。之后以一般水洗來(lái)脫色。但經(jīng)孔雀石綠染色后之孢子,不易被水洗脫色。仍保留綠色。
但是孔雀石綠對(duì)生長(zhǎng)型細(xì)胞之結(jié)構(gòu)成份不具親和力,所以水洗會(huì)移去殘留的染料
使細(xì)菌變成無(wú)色。最后再以番紅(safranin)來(lái)複染,經(jīng)脫色后之生長(zhǎng)型細(xì)胞會(huì)變
成紅色,借此與綠色之孢子來(lái)區(qū)分
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