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正文:
胚移置步驟:
一、胚之收集與移置前之準(zhǔn)備:
在配種后 1~6 日間,供胚母兔經(jīng)外科腹腔手術(shù)或予以犧牲放血后,暴露其生殖系統(tǒng)(含卵巢、輸卵管、子宮),檢視卵巢排卵情形。
自子宮頸穿入接收導(dǎo)管,并固定之。
以 silicone tubing 自輸卵管部小心穿入,并以手指固定 tubing 前端與輸卵管部。
將沖洗液自 syringe 中緩慢注入(約 5~7 ml,并觀察輸卵管是否鼓起),而自接收導(dǎo)管回收流出之沖洗液。
以手指輕輕擠壓留在生殖道中之沖洗液,使回收完全。
重覆相同的動(dòng)作,沖洗另一邊之輸卵管或子宮。
將回收之含胚試管經(jīng)靜置 3~5 分鐘后,以 Pasteur pipette 自試管吸出底層之沖洗液至培養(yǎng)皿 (petri dish) 中。
微微搖動(dòng) petri dish 使胚集中于培養(yǎng)皿之中央后,以
立體或倒立
顯微鏡檢視胚之?dāng)?shù)目及品質(zhì)。
將胚以培養(yǎng)液清洗三次后,裝入移置用之注入管中。
胚之收集
二、受胚母兔之準(zhǔn)備與移置:
受胚母兔 (recipient) 經(jīng)假懷孕處理(以輸精管結(jié)紮 之公兔配種或靜脈注射 HCG )后依體重注射 zylazine (5mg/kgBW) 與 Ketamine (30mg/kgBW) 予以全身麻醉,再固定于手術(shù)臺(tái)上,并將腹部手術(shù)部位之兔毛剃除。
手術(shù)部位,先涂擦酒精和碘酒消毒之,再覆以手術(shù)覆布 ,并以覆布鋏固定之。
于倒數(shù)第 1~2 對(duì)乳頭部位之腹中切開(kāi) 3~5 cm 之開(kāi)口。
輕輕以手指勾出單邊之部份子宮,并檢視卵巢排卵狀況, 經(jīng)確定排卵后,即以手指小心固定輸卵管部。
將含胚及培養(yǎng)液之注入管( silicone tubing )前端,自輸卵管部導(dǎo)入約 2~3cm,并手指輕壓固定之。
以 syringe 徐徐將胚及培養(yǎng)液注入管推送入輸管中。
完成移置后,以含100IU/ml Heparin 之生理食鹽水清洗內(nèi)臟之血跡;縫合腹壁及皮膚層后,于傷口涂擦碘酒,并在皮下注射 1ml combion,隔日再予注射一次。
安置受胚母兔于清潔舒適之環(huán)境,令其緩慢甦醒。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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