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正文:
1、細(xì)胞培養(yǎng)
將細(xì)胞培養(yǎng)基加入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng) (細(xì)胞菌株為 RAW 264.7
細(xì)胞,使用的細(xì)胞培養(yǎng)基為 DMEM ),置于 5 %二氧化碳培養(yǎng)箱 (控制溫度 37℃),24 小時(shí)后更換塑膠培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。
2、種植細(xì)胞于 96 微量板孔培養(yǎng)槽 ( 96-well microplates )由 5 %二氧化碳培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)瓶,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情
形,如達(dá)七、八分滿時(shí)即可開始種植細(xì)胞;首先除去培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)之培養(yǎng)基,加入 PBS 溶液,沖洗死細(xì)胞,并將之汲去。
加入 4 ml 的 trypsin-EDTA 沖洗瓶壁,放入 5 %二氧化碳培養(yǎng)箱中,10 分鐘后取出,振搖瓶身使附著在瓶壁的細(xì)胞離開瓶
壁,取出此細(xì)胞液置于離心管中,另加 6 ml 的 DMEM 培養(yǎng)基后,于 3000 rpm 離心 10 分鐘。
去除上清液,加入 10 ml DMEM 后,均勻混合,取細(xì)胞混合液 20 μl 與 20 μl 的錐藍(lán)染劑 ( trypan ) 混合,于顯微鏡上觀
察細(xì)胞總數(shù),并于血球計(jì)數(shù)盤上計(jì)數(shù)細(xì)胞。取一個(gè)無(wú)菌的 96培養(yǎng)槽,吸取適當(dāng)?shù)募?xì)胞液注入每個(gè)培養(yǎng)槽上,使每個(gè)培養(yǎng)槽
剛好是 10000 個(gè)細(xì)胞數(shù),完成后置于 5 %二氧化碳培養(yǎng)箱中 (控制溫度 37℃),培養(yǎng) 24 小時(shí)
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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