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正文:
最通用的FP和EGFP非常明亮,因此即使在一般的表達水平,它們也具有較高的
信噪比。另外,兒種新引入的來源于珊瑚蟲的FP顯示出遠超出EGFP的
熒光水平。所
有這些因素可以使成像的靈活性大增,甚至在顯微鏡光學條件和數(shù)碼相機特性不太理
想的狀況下也能有很高的實驗成功率。盡管如此,習慣于使用免疫熒光采用內(nèi)源信號
擴增成像的科研入員可能會發(fā)現(xiàn)FP的熒光比較弱。這種情況在實驗需要使用一種弱光
突變體(如BFP, CFP或遠紅外熒光蛋白)時更為明顯。在這種情況下,信噪比可能
相當?shù)牡,因此需要?yōu)化FP的檢測。檢測的效率主要取決于三種因素:物鏡、濾光片
和檢測器。限于篇幅,無法在本章中討論如何選擇某些特定應用的最優(yōu)組合的細節(jié)和
平衡優(yōu)化。但是有兒個通用的原則應該被一直遵循。
雖然物鏡的選擇通常被最少考慮,但是在成像實驗優(yōu)化配置時物鏡可能是最需要
重點考慮的因素。物鏡決定樣品成像的空間分辨率和控制從樣品收集的熒光址。通常
情況下,最好選擇具有最大數(shù)位孔徑(NA)的鏡頭,因為這樣可以最大可能地收集信
號.其他在實際操作中需要考慮的因素還有工作距離、視野和在鏡頭設計中的光學校
正
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北京顯微鏡百科
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