標(biāo)題：各種化合物的柱層析分離是生化工作中使用最廣泛的技術(shù)
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2016-1-5 22:17:28
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正文:
各種化合物的柱層析分離是生化工作中使用最廣泛的技術(shù)
層 析
柱層析的實(shí)踐
各種化合物的柱層析分離是生化工作中使用最廣泛的技術(shù)之一。
在論述各種類(lèi)型的柱層析方法之前，先考慮柱子的 準(zhǔn)備和操作中
的一般注意事項(xiàng)。
柱子 層析柱一般是玻璃的。長(zhǎng)柱的分辨率通常較 高，然而投料量
大時(shí)用粗柱更好。
材料備 用于層析分離的材料很多，裝柱之前，都要 和溶劑平衡。
此外，常常還需要做一些預(yù)處理，如一些凝膠過(guò) 濾的材料需要膨
脹，吸附劑需要加熱或酸處理活化，離子交換 樹(shù)脂必須用洗滌法
轉(zhuǎn)變成為需要的離子型。
和溶劑平衡期間，讓裝柱的材料沉降，用傾析法除掉懸液 中漂浮
的細(xì)小顆粒 不去掉這種細(xì)小顆粒,它們
就會(huì)堵住柱中的空隙，顯著減小溶劑的流速。
分部收集和分析 用手工，或更普遍地是用自動(dòng)分部 收集器將來(lái)自
柱子的流出液收集在一系列試管里。該收集器 將預(yù)定體積或滴數(shù)
的流出液收集到一支試管里，然后移開(kāi)這 支試管，換上另一支試
管。分析毎一組分中所研究的化合物， 畫(huà)出洗脫的化合物的S對(duì)流
出液體積的洗脫圖形。讓流出液 連續(xù)通過(guò)一個(gè)流動(dòng)比色池，測(cè)量
在280毫微米或260毫澉米 的光吸收，便能監(jiān)測(cè)每一組分中蛋白質(zhì)
或核酸的含量。
斑點(diǎn)的檢出 許多化合物是無(wú)色的，要用特殊的試劑 呈色。施加呈
色試劑的辦法，是將呈色試劑噴在濾紙上，或?qū)?濾紙?jiān)谟脫]發(fā)性
溶劑配制的呈色試劑里面快速浸一下。在紫 外光下面觀察層析圖
譜也是有用的，因?yàn)槟承┗衔飶?qiáng)烈吸 收紫外光，在紫外光照射
下濾紙發(fā)生熒光，而該化合物呈黑 色。另外，一些化合物在紫外
光下呈現(xiàn)特征性的熒光。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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