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正文:
實(shí)驗(yàn)室用桿菌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)檢測圖像
顯微鏡
(1) 轉(zhuǎn)化。重組DNA分子的擴(kuò)增需要環(huán)狀DNA轉(zhuǎn)染進(jìn)人合適的宿主細(xì)胞。
新的重組I)NA分子隨著細(xì)胞的復(fù)制而擴(kuò)增。整個(gè)過程叫做轉(zhuǎn)化,同時(shí)環(huán)
狀DNA被獲得新的性質(zhì)的宿主細(xì)胞所攝取。細(xì)胞吸收DNA的確切過程并不
清楚,在大腸桿菌中用兩種方法,包括電穿孔法和輕微的熱激法來進(jìn)行
DNA的轉(zhuǎn)化。結(jié)果是膜出現(xiàn)裂縫,同時(shí)小的環(huán)狀DNA被宿主細(xì)胞吸收。以
大腸桿菌為例,轉(zhuǎn)化過程需要特殊的處理,細(xì)胞通常被叫做“感受態(tài)”
,意思是他們處在一種易被質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化的狀態(tài)。
(2)重組鑒定。細(xì)胞如大腸桿菌在轉(zhuǎn)化以后可以在富含營養(yǎng)的培養(yǎng)
基上生長,在這里,許多載體中含有的標(biāo)記基因是非常有用的。在實(shí)驗(yàn)
室用的一般的大腸桿菌細(xì)胞缺乏對抗生素,如氨芐青霉素、四環(huán)素和卡
那霉素的抵抗力。然而用含有一兩個(gè)抗生素抗性基因的載體轉(zhuǎn)化的大腸
桿菌可形成有抵抗力的細(xì)胞。因此當(dāng)細(xì)胞生長在含有一種抗生素的瓊脂
培養(yǎng)基中時(shí),只有被含有抗生素抗性基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的細(xì)胞可以生長。
這種篩選的過程使在以后的實(shí)驗(yàn)過程中只有被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞作進(jìn)一步的研
究。如果知道質(zhì)粒DNA
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