標(biāo)題：根據(jù)它們的分子大小排阻或凝膠過(guò)濾層析
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2016-10-2 13:51:38
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正文:
根據(jù)它們的分子大小排阻或凝膠過(guò)濾層析
分子排阻或凝膠過(guò)濾層析
分子排阻法分離蛋白質(zhì)是根據(jù)它們的分子大小來(lái)分離的。這種方法
的原理是使液體流過(guò)帶孔的珠子來(lái)分離蛋白質(zhì)。這些小孔有固定的大小
，是由共價(jià)的聚合體交聯(lián)形成的。在不同分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)混合物里有
一些小到可以通過(guò)小孔，因此它們流過(guò)柱子的速度較慢。大一些的蛋白
質(zhì)很少可以進(jìn)入小孔，它們通過(guò)樹(shù)脂的過(guò)程不受阻礙。非常大的蛋白質(zhì)
通過(guò)“孔隙體積”被洗脫，并且不和小孔有相互作用的所有蛋白質(zhì)都可
通過(guò)“孔隙體積”被洗脫，這個(gè)與蛋白質(zhì)的分子大小無(wú)關(guān)。流過(guò)柱子的
速度反應(yīng)了與小孔相互作用的程度；小的蛋白質(zhì)花費(fèi)大量時(shí)間在小孔內(nèi)
的溶劑體積里，洗脫速度遠(yuǎn)慢于只與珠子邊緣發(fā)生作用的蛋白質(zhì)。很明
顯這個(gè)過(guò)程為分離不同大小的蛋白質(zhì)提供了有效的方法。
理想的情況下洗脫體積與分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系。這意味著
如果一個(gè)分子排阻柱子由已知分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)校準(zhǔn)后，分子質(zhì)量未知
的蛋白質(zhì)可以通過(guò)洗脫位置來(lái)推測(cè)它的分子質(zhì)量。如果未知分子質(zhì)量的
蛋白質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)蛋白的形狀相似，那么可以對(duì)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量進(jìn)行比較精
確的推測(cè)，這是因?yàn)榉肿优抛鑼游龅倪^(guò)程對(duì)溶液中蛋白質(zhì)占有的平均體
積比較敏感。這個(gè)體積通常用蛋白質(zhì)的斯托克斯半徑表示，這個(gè)常量受
蛋白質(zhì)總體形狀影響很大。因此，長(zhǎng)蛋白如纖維蛋白質(zhì)呈現(xiàn)不規(guī)則的移
動(dòng)速度。對(duì)分子排阻層析的嚴(yán)格定義應(yīng)該是根據(jù)不同的流體動(dòng)力學(xué)半徑
來(lái)分離蛋白質(zhì)。現(xiàn)在分子排阻層析很少用來(lái)分析亞基分子質(zhì)量而用來(lái)去
除蛋白質(zhì)中的雜物。通常用來(lái)去除蛋白質(zhì)樣品中的鹽或把蛋白質(zhì)從一種
緩沖液換到另一種緩沖液中。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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