標(biāo)題：圖象分析儀、顯微分光光度計(jì)、熒光顯微分光光度計(jì)
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2016-11-13 17:54:15
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正文:
近年來，不僅在光鏡，也在電鏡的超微結(jié)構(gòu)水平上進(jìn)檸原位
雜交研究，并用圖象分析儀、顯微分光光度計(jì)、熒光顯微分光光度
計(jì)等進(jìn)行原位雜交的定量測定，使該技術(shù)的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，并
和其它先進(jìn)技術(shù)相互滲透、相互結(jié)合，從而形成原位雜交斷層攝影
術(shù)、原位雜交—免疫組化并檢技術(shù)、雙重或多重原位雜交技術(shù)、原
位雜交特異核酸流式計(jì)數(shù)法、染色體高分辨暨原位雜交特異基因位
點(diǎn)定位法等原位雜交一般操作步驟
原位雜交的操作過程較為繁雜，方法也較多，不僅用于冰凍切
片、石蠟切片，而且還用乏塑胞涂片、染色體滴片及電鏡超薄切片
等。不同的切片其操作步驟有所不同，這里介紹原位雜交的一般操
作步驟。
固定
冰凍切片敏感性高于石蠟切片，在前者可檢出單拷貝核酸，在
石蠟切片則需5—6個拷貝方可檢出。為防止DNA或RNA的丟失，組織
要經(jīng)三次固定：①預(yù)固定，即對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行灌注固定，用多聚甲
醛固定液優(yōu)于戊二醛固定液。②取材固定，指取材后進(jìn)行直接浸泡
固定或冰凍切片后進(jìn)行固定。用酒精一冰醋酸(3：1)固定，可提高
雜交率，又可保存良好的組織形態(tài)。細(xì)胞學(xué)涂片可用甲醇—冰醋酸
(3：1)固定液固定。醛類固定劑可用于電鏡水平的研究，但雜交率
低，電鏡的原位雜交一般采用多聚甲醛固定。凡含戊二醛、汞，鉛
等的固定液一般不宜采用，因?yàn)樗鼈兏蓴_DNA的解鏈。③后固定，
指組織經(jīng)蛋白酶、核酸酶處理后，用多聚甲醛作后固定，以穩(wěn)定核
酸，提高雜交效率。組織保存時間和保存方法直接影響RNA的檢出
，冰凍切片僅在一個月內(nèi)有效。石蠟切片制成后應(yīng)立即使用，若在
4℃保存，6個月內(nèi)有效。時間太長，雜交效率低。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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