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正文:
重組DNA技術在商業(yè)化水平的應用需要對合適宿主一載體系統(tǒng)進行
審慎的選擇。大腸桿菌極大地促進了復雜的基因操作,但是出于工
藝過程或產物方面的考慮,建議使用替代的宿主。釀酒酵母很容易
培養(yǎng),并且是安全的,在監(jiān)管許可方面也非常簡單。但是對于一些
蛋白質來說,釀酒酵母的生產率比較低,過度糖基化也是一個問題
。畢氏酵母能生產高濃度的蛋白質,但甲醇的使用給反應器控制和
安全帶來了挑戰(zhàn)。芽孢桿菌和低等真菌具有很好的分泌系統(tǒng),如果
能夠很好地控制它們,將是非常具吸引力的。若必須經過翻譯后修
飾,就需要利用動物細胞培養(yǎng)。哺乳動物細胞提供了類似于真實天
然產品的最高保真度。昆蟲細胞系統(tǒng)具有潛在的高表達能力以及比
哺乳動物細胞更高的安全性,但是降低了翻譯后加工過程的保真度
。對于需要復雜翻譯后修飾過程的蛋白質來說,轉基因動物是一種
很好的替代方法。轉基因植物和植物細胞培養(yǎng)適合于大量蛋白質的
生產。植物特別適合生產用于口服或局部釋放的蛋白質。
宿主一載體系統(tǒng)僅在其能維持足夠長的時問來生產商業(yè)上非常
重要的產品時才是有用的。遺傳不穩(wěn)定性是指丟失了制造目標蛋白
的遺傳信息。當細胞分裂時產生無質粒細胞,即發(fā)生了分配不穩(wěn)定
性。細胞由于質粒結構的改變而喪失了大量合成目標蛋白的能力,
即結構不穩(wěn)定性。宿主細胞導致的不穩(wěn)定性發(fā)生在宿主染色體突變
降低了質粒編碼蛋白質的有效產量時,而此時細胞仍然保留有質粒
。與生長速率相關的不穩(wěn)定性是無質粒細胞和含質粒細胞之間生長
速率細微差別的結果。在決定發(fā)酵能夠維持多長時間方面,遺傳不
穩(wěn)定性是一個決定性的因素?梢允褂煤唵蔚哪P蛠砉浪氵z傳不穩(wěn)
定性。
為達到優(yōu)化目標過程的目的,必須對載體進行設計。需要考慮
的因素包括:載體拷貝數、啟動子強度、啟動子的調節(jié)、融合蛋白
質的使用、信號序列與分泌、提供選擇性壓力的基因以及提高質粒
分配精度的元件。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科