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正文:
原綠球藻與聚球藻同時(shí)被CCD
顯微鏡實(shí)驗(yàn)室
理論上,對(duì)BCM的正確計(jì)數(shù)應(yīng)該是以總紅外陽(yáng)性計(jì)數(shù)減去藍(lán)細(xì)
菌計(jì)數(shù)獲得。但是原綠球藻的存在使得無(wú)法確認(rèn)紅外陽(yáng)性計(jì)數(shù)中的
總藍(lán)細(xì)菌數(shù)。因?yàn)樵G球藻是大洋中豐度最大的藍(lán)細(xì)菌,他也能夠
被CCD捕獲到紅外
熒光,但其單細(xì)胞葉綠素含量較低,其紅色熒光
信號(hào)會(huì)被海水中共存的聚球藻的強(qiáng)紅色熒光信號(hào)所掩蓋,因此在曝
光的最初時(shí)間內(nèi)無(wú)法被CCD捕獲到。根據(jù)熒光半衰期的原理,當(dāng)細(xì)
胞在激發(fā)光下曝光一段時(shí)間后,聚球藻與原綠球藻的紅色熒光強(qiáng)度
差別會(huì)縮小,這樣原綠球藻才能夠逐漸與聚球藻同時(shí)被CCD捕獲到
。因此,在藍(lán)細(xì)菌的時(shí)間序列成像過(guò)程中,準(zhǔn)確的總藍(lán)細(xì)菌(原綠
球藻和聚球藻)數(shù)并不是最初的圖像計(jì)數(shù),而是經(jīng)過(guò)一段時(shí)間曝光
后的計(jì)數(shù)。所以,每個(gè)視野的BCM的精確計(jì)算公式是:BCM細(xì)胞數(shù)一
紅外熒光時(shí)間序列成像時(shí)處于穩(wěn)定期的紅外陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)一紅色熒光
時(shí)間序列成像時(shí)處于穩(wěn)定期的藍(lán)細(xì)菌細(xì)胞數(shù)。TIREM方法對(duì)傳統(tǒng)顯
微鏡方法理念是一個(gè)沖擊:在傳統(tǒng)的落式熒光顯微法或IREM法中,
為避免熒光淬滅人們往往選擇快速觀察檢測(cè)計(jì)數(shù);而TIREM方法的
實(shí)踐告訴人們,時(shí)間序列的觀察是獲得可信數(shù)據(jù)的關(guān)鍵。在對(duì)BCM
和藍(lán)細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室純培養(yǎng)的檢測(cè)和野外海水樣品的檢測(cè),都驗(yàn)證了
TIREM法的有效性。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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