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正文:
細(xì)胞組分的實(shí)驗(yàn)
顯微鏡-蛋白質(zhì)及小的細(xì)胞溶質(zhì)顆粒
分離細(xì)胞的主要亞細(xì)胞組分包括:①致密細(xì)胞器,如線粒體、細(xì)胞
核和溶酶體;②膜系統(tǒng),包括細(xì)胞膜、高爾基復(fù)合體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng);③細(xì)胞
骨架結(jié)構(gòu);④蛋白質(zhì)及小的細(xì)胞溶質(zhì)顆粒。組織的四種主要類型是上皮
組織、結(jié)締組織、肌肉組織和神經(jīng)組織。所有組織都含有組成其功能單
位的特殊細(xì)胞類型。毗鄰細(xì)胞之間,以及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)或者基底膜
之間的結(jié)構(gòu)和化學(xué)黏附機(jī)制維持著組織的完整性。細(xì)胞由多種特異連接
復(fù)合體連接在一起,這些復(fù)合體涉及到不同的細(xì)胞骨架微絲和不同家族
的細(xì)胞黏附分子,包括二價(jià)陽離子依賴的鈣黏素和黏附素(M92+和Ca2+)
。組織的裂解過程要求破壞細(xì)胞間的黏附并對細(xì)胞的傷害最小。因?yàn)榉?/div>
離過程本身有損細(xì)胞的完整性和功能,所以為保障分離的細(xì)胞具有完整
細(xì)胞活力和功能,必須優(yōu)化針對特異細(xì)胞組分的分離條件。
其次,研究亞細(xì)胞組分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性依賴于獲得這些組分的
分離細(xì)胞的質(zhì)量。用于分離單一細(xì)胞的方法一定要能維持群體的活力和
代謝活性;用于關(guān)聯(lián)結(jié)果的一條定量基線和實(shí)驗(yàn)組內(nèi)結(jié)果比較是非常必
要的。細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞活力和蛋白質(zhì)含量的檢測可以提供這個基線。
實(shí)體組織,包括血液、胸和腹?jié)B出液在內(nèi)的
生物液體和細(xì)胞系都是
分離細(xì)胞的潛在來源。從新鮮組織來的細(xì)胞可能是異質(zhì)性的,因此需要
鑒別細(xì)胞的方法。建議確認(rèn)從細(xì)胞系分離出的細(xì)胞類型。
不同組織的結(jié)構(gòu)異質(zhì)性妨礙了使用同一種方法分離細(xì)胞。盡管組織
特異性的分離方法具有一些共同特征,例如使用機(jī)械方法將組織打散為
小塊,及使用酶消化支撐基質(zhì)以釋放單細(xì)胞?梢酝ㄟ^改變酶的種類、
酶的濃度、消化時(shí)間和溫度,來優(yōu)化從不同組織獲得單細(xì)胞的方法。
但從細(xì)胞培養(yǎng)需要維持細(xì)胞的代謝和增殖功能的角度來看,它們都
是相關(guān)的。移植培養(yǎng)用于細(xì)胞數(shù)量很少的細(xì)胞群,需要擴(kuò)增細(xì)胞的數(shù)量
。
這里僅提供了用于分離人卵巢癌組織細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方案,而沒有提供
適用于各種特異組織的不同實(shí)驗(yàn)方案。這些腫瘤的特點(diǎn)迥異,需要許多
實(shí)驗(yàn)技術(shù)去完成,這就為機(jī)械法和酶消化法分離細(xì)胞提供了一個出發(fā)點(diǎn)
。實(shí)驗(yàn)方案適用于不同類型的組織,也可以作為建立最優(yōu)分離條件的基
礎(chǔ)。
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