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正文:
細菌的孢子是生長在適當瓊脂培養(yǎng)基的表面顯微鏡
驗菌懸液的制備
給定菌種的細胞孢子的耐熱性是隨產(chǎn)生孢子培養(yǎng)基的性質(zhì)和溫
度而定!悴捎锰峁┻m當?shù)臈l件,以獲得產(chǎn)生耐熱性最高的孢子
。專性厭氧菌的最好孢子通常是在最低的保溫培養(yǎng)溫度下取得,此
時正是處于營養(yǎng)體茁壯生長階段。對芽孢桿菌屬來說,耐熱性最高
的孢子一般是在最高保溫培養(yǎng)溫度而取得,此時正是處于營養(yǎng)體茁
壯生長階段。
孢子的產(chǎn)生和收集
孢子良好發(fā)芽所需要的營養(yǎng)條件往往與良好營養(yǎng)體生長的營養(yǎng)條
件不同,因此,一些培養(yǎng)基可激勵營養(yǎng)體良好地生長,但孢子在這
些培養(yǎng)基上發(fā)芽卻很差。
專性需氧菌和兼性厭氧菌
這些細菌的孢子是生長在適當瓊脂培養(yǎng)基的表面。下面介紹一種
廣泛采用的方法。瓊脂斜面培養(yǎng)試管用試驗菌生長活潑的培養(yǎng)物接
種。然后升至適當溫度保溫培養(yǎng)2~4天。當鏡檢出現(xiàn)高的成熟孢子
時,則從保溫培養(yǎng)箱取出斜面培養(yǎng)物并把表面生長物懸浮在無菌水
中。為了懸浮生長物,每管要加3毫升的無菌水。同時用無菌接種
環(huán)把生長物從表面刮下,懸浮于水中。后從許多斜面培養(yǎng)基將培養(yǎng)
物收集于無菌的螺旋蓋稀釋瓶中,而成為懸液。然后將懸液在80℃
加熱20分鐘,以破壞營養(yǎng)細胞,并活化孢子,以促進發(fā)芽。這種加
熱的懸液用于瓊脂斜面培養(yǎng)瓶的接種,以供大量生產(chǎn)孢子。
用容量150毫升的螺旋蓋瓶作為斜面培養(yǎng)瓶是較方便的,如果
需要,也可采用更大的或較小的瓶子。當采用150毫升的瓶子時,
則每瓶裝50毫升瓊脂,并在121℃的壓熱器中加熱殺菌20分鐘,熱
殺菌后,把瓶子斜放以獲得最大的瓊脂表面。
每瓶接入2毫升經(jīng)加熱的孢子懸液,其制備法如上所述。然后
把每個瓶子前前后后地傾斜,直至接種物覆蓋全表面。接種過的瓶
子在適當溫度下保溫培養(yǎng),直至生長與發(fā)芽完成(保溫培養(yǎng)時,瓶
子斜放成大約40。角,以便過量的接種物與冷凝水集中于瓶底)。
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北京顯微鏡百科
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