標題：明視野光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化定性或定位研究技術(shù)
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2011-11-6 13:45:09
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正文:
實驗/實習原理
利用染色劑可同細胞的某種成分發(fā)生反應而著色的原理，對某種成分進行
定性或定位研究的技術(shù)，藉以利用明視野光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)上的變化。
實驗/實習藥品與設備
1、 Cytospin 3細胞自動離心固著機
2、 劉氏染色液(Liu Stain)
實驗/實習內(nèi)容與步驟
1、 Cytospin 3細胞自動離心固著機：
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(一)Cytospin 3細胞機為英國Shandon 公司生產(chǎn)。
(二)密封離心頭有12個樣本室（離心頭可高溫消毒）。
(三)隨機配有12個樣本夾，單孔離心漏斗及相配套的濾片供你選用。
(四)總體積＜350ml，裝入離心頭的樣本室內(nèi)。
(五)要注意對稱、平衡。
(六)濾片經(jīng)消毒處理可復用。
(七)一次可處理12個樣本，涂片范圍294平方毫米。
(八)一次約需使用2 x 104 顆白血球細胞，細胞量要正確。
2、 Cytospin巧妙地利用力學原理，通過旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力將細胞從其懸浮液
中分理出來，然后讓沉積細胞在載玻片，液體則被過濾片吸收。
3、 細胞自動離心固著機製片過程：
(一)細胞離心機內(nèi)置一隻可高速旋轉(zhuǎn)的密封盤，叫做密封離心轉(zhuǎn)子。
(二)密封離心轉(zhuǎn)子內(nèi)有十二個穴腔，叫做樣本室。
(三)樣本夾將載玻片緊夾在襯有過濾片的離心漏斗平面，嵌于樣本室的導
槽
內(nèi)。
(四)樣本液 (約2 x 104 顆白血球細胞，總體積＜350ml) 注入固定好的離心漏
斗喇叭口內(nèi)（注意對稱、平衡）。
(五)蓋緊離心頭蓋，放入離心機，并檢查正常鎖定機蓋后，選擇程序，開
始離心。通過旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力，將懸浮在樣本液中的細胞分離并沉積
在載玻片上，樣本液的液體則被過濾片吸收。
(六)用速度控制鍵控制離心機轉(zhuǎn)數(shù)，范圍800～1000rpm；用高低檔加速控
制
鍵控制速度變化率。
(七)運行時間可約5分鐘，并可設置23個程序供選用。
(八)白血病細胞常規(guī)使用約設定800rpm。低檔加速800rpm/5分鐘。
(九)離心完畢，取下玻片，立即染色固定標本。載玻片上形成一形態(tài)完
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好，單層平鋪的細胞。
(十)清洗樣本夾，漏斗和濾片浸泡在清潔液中洗淨，再以酒精消毒液浸
泡，
清洗烘乾備用。
(十一)離心機用消毒液擦洗，再用乾紙巾擦淨備用。
4、 劉氏染色液(Liu Stain)：
(一)劉氏染色液(Liu Stain)是由臺灣大學劉禎輝教授在1953年所研究發(fā)表的
一種染色技術(shù)。
(二)主要應用于血液抹片染色，它跟瑞特氏染色(Wright Stain)一樣，都是利
用瑞氏染色「Romanowsky Stain」原理改良而成的，所得到的結(jié)果也跟
瑞氏染色液相類似，只是劉氏染色液所花費的時間非常短，只需90秒即
可完成染色步驟。
(三)劉氏染色在臨床上的應用非常廣泛，除了主要作為血球形態(tài)分類染色之
外，也可以當作組織學的簡易染色，在臨床細菌學上的使用更可以作
為陰道分泌物、痰液、濃液等檢體的簡單染色劑(Simple Stain)。
5、 Liu’s stain步驟：
(一)Liu’s A溶液0.2 ml，覆蓋于標本上。
(二)染色30秒后。
(三)逐漸滴滴上Liu’s B溶液0.4 ml (2 x體積Liu’s B)，用吸球吹氣，使二液溷
合均勻。
(四)1~2分鐘后，用水沖洗至標本色呈澹紅紫色，乾燥后就可鏡檢。
(五)標本之新舊及水之pH值影響染色效果甚大。
(六)標本宜于當天染色并採用蒸餾水沖洗。
注意事項
1、 Cytospin 3 細胞離心涂片機操作注意事項：
(一)加入的漏斗內(nèi)的液基樣本量＜350ml。按裝漏斗杯注意對稱、平衡。
(二)漏斗杯的裝取均應在機外進行，因離心機中央的裝置較精細、靈敏，在
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機內(nèi)操作，易影響平衡，產(chǎn)生故障。
(三)漏斗內(nèi)液基樣本量較多時，濾片不能吸盡，會甩入離心頭。應清除后進
行下一次操作，否則影響平衡。
(四)離心轉(zhuǎn)子密封圈一定要放正，如果未正確放置，離心時液體極易從離心
頭內(nèi)甩出，進入離心機，要及時擦乾離心機內(nèi)的液體，否則液體進入馬
達，引起馬達生銹，導致故障。
(五)離心機每天使用結(jié)束后，要做好清洗、消毒、保養(yǎng)工作。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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