顯微鏡下研究海鱺成長(zhǎng)脂肪量與其脂肪細(xì)胞數(shù)目大小分布的關(guān)系!,顯微鏡,金相顯微鏡,生物顯微鏡

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正文:

研究海鱺成長(zhǎng)脂肪量與其脂肪細(xì)胞數(shù)目大小分布的關(guān)系!

本研究的目的是探討海鱺成長(zhǎng)、脂肪蓄積量與其脂肪細(xì)胞數(shù)目大小分布的關(guān)系，并了解是否能經(jīng)由調(diào)整海鱺飼料中的油脂質(zhì)量來(lái)改變
海鱺幼魚(yú)的肌肉中所含的脂肪細(xì)胞數(shù)目及大小分布，以達(dá)到調(diào)控脂肪蓄積量的目的。以求實(shí)驗(yàn)結(jié)果能在商業(yè)飼料上有實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。

材料與方法
一、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
本實(shí)驗(yàn)以海鱺 ( Rachycentron canadum)為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
二、 養(yǎng)殖系統(tǒng)
進(jìn)行海鱺養(yǎng)殖時(shí)，以圓形玻璃纖維水缸 (直徑 1m、水位高 30 –
40cm)采流水式飼養(yǎng)，每缸放置一顆打氣石，以通風(fēng)管連接鼓風(fēng)機(jī)進(jìn)
行打氣，試驗(yàn)期間水溫維持在 28℃，鹽度維持在 30±1 ppt。
三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
實(shí)驗(yàn)一、確認(rèn)成年海鱺體脂肪細(xì)胞的分布狀況，將成年海鱺 (n=3)魚(yú)肉自鰓蓋到臀鰭上方為止整塊取下，側(cè)線以上為背肉、以下為腹
肉。取下的魚(yú)肉分為前中后三區(qū)，分析粗脂肪含量與脂肪細(xì)胞數(shù)目及大小分布，
用來(lái)確定海鱺新生成的體脂肪細(xì)胞是否分布在腹、背部前方，并為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)確認(rèn)魚(yú)體取肉部位。

實(shí)驗(yàn)二、探討大型海鱺養(yǎng)殖場(chǎng)于相同環(huán)境下所飼養(yǎng)的海鱺 (從幼
苗到成魚(yú))，粗脂肪含量與脂肪細(xì)胞數(shù)目及大小分布的相關(guān)性。每 4
週采樣一次 (n=3)，觀察海鱺幼魚(yú)到成魚(yú)體脂肪蓄積量與脂肪細(xì)胞數(shù)
目及大小分布的變化，探討海鱺體脂肪組織成長(zhǎng)是否經(jīng)由脂肪細(xì)胞數(shù)
目變多和細(xì)胞變大而來(lái)。采樣部位同實(shí)驗(yàn)一

實(shí)驗(yàn)三、飼料中不同油脂來(lái)源對(duì)海鱺幼魚(yú)體脂肪蓄積量的影響，
探討相同油脂含量的飼料中，以玉米油取代魚(yú)油是否會(huì)改變體脂肪的
蓄積量�；�礎(chǔ)飼料以魚(yú)粉及魚(yú)油為主要的脂質(zhì)源，試驗(yàn)組以玉米油取
代魚(yú)油。共計(jì)兩種飼料，每組三重覆，養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)預(yù)計(jì)進(jìn)行八週。采樣
部位同實(shí)驗(yàn)一。
四、實(shí)驗(yàn)分析方法
1. 飼料粗成分分析
包括水分、灰分、粗蛋白質(zhì)、粗纖維、粗油脂，粗油脂以油脂熱
萃取機(jī) (Soxtec System HT 1043 Extraction Unit)，其余依照 A.O.A.C.(1984)來(lái)測(cè)量。
2. 魚(yú)肉粗油脂分析
以油脂熱萃取機(jī) (Soxtec System HT 1043 Extraction Unit)分析魚(yú)
肉樣品中粗油脂的含量。
3. 脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)
依照 (Fauconneau et al., 1997)的實(shí)驗(yàn)步驟，新鮮魚(yú)肉樣品 100mg
經(jīng) 2%鋨酸溶液固定后，以 8M 的尿素溶液溶解未被固定的物質(zhì)，經(jīng)
適當(dāng)孔徑的濾紙過(guò)濾后以光學(xué)顯微鏡檢視脂肪細(xì)胞大小分布、血球計(jì)
數(shù)盤(pán)分析脂肪細(xì)胞數(shù)量。

4. 冷凍切片
處理過(guò)程依冷凍切片製作方法製成冷凍切片，觀察脂肪細(xì)胞在魚(yú)
肉中的分佈情況。
預(yù)期結(jié)果
研究的結(jié)果可以確定海鱺飼料中油脂來(lái)源及含量是否影響魚(yú)體
脂肪細(xì)胞的數(shù)量及大小分布變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以作為之后海鱺飼料配
方的參考依據(jù)。
可能遭遇的困難
避免海鱺養(yǎng)殖過(guò)程所發(fā)生死亡狀況。脂肪細(xì)胞的固定、萃取及過(guò)
濾計(jì)數(shù)之操作過(guò)程可能流失部分細(xì)胞樣本造成實(shí)驗(yàn)誤差。
重要儀器設(shè)備
冷凍切片機(jī)
養(yǎng)殖設(shè)備
飼料配置設(shè)備
脂肪熱萃取機(jī)
粗纖維萃取器
總氮蒸餾機(jī)
光學(xué)顯微鏡