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心肌細(xì)胞缺氧缺血清及再灌流模式試驗(yàn)方法！
 
(1)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />利用H9C2心肌細(xì)胞缺血缺氧的情況，以模擬心肌梗塞情況。
 
 
(2)實(shí)驗(yàn)材料：
H9C2細(xì)胞，H9C2 medium，細(xì)胞培養(yǎng)箱，No Glucose DMEM，Biospherix Model Proox，Calibration Chamber，Calibration Chamber with tubing，N2。
 
 
(3)實(shí)驗(yàn)方法：
1.從冰箱中取出要用到的材料，并利用37℃水浴槽回溫。
2.進(jìn)行Biospherix Model Proox主機(jī)校正。
3.拔下Calibration Chamber后方的O2 sensor，接上Calibration Chamber with tubing，另一端接上主機(jī)前方的Bleed gas outlet小孔。
4.將GAS鈕搬動(dòng)在OFF位置。
5.開N2氣，慢慢鬆開Bleed Valve，觀察O2讀值，應(yīng)為0，若不為0，則需進(jìn)行ZERO校正。
6.ZERO功能校正：通是按↑↓鍵3秒，會(huì)進(jìn)入Program mode，再按↓鍵會(huì)看到LEVEL目錄，按住*鍵以↑鍵選擇目錄3，放開*鍵后按↑鍵至ZERO功能，按住*鍵再以↑↓鍵調(diào)整數(shù)值(↑鍵為增加，↓鍵為減少)，調(diào)整完畢，同時(shí)按↑↓鍵3秒會(huì)到Work mode，觀察O2讀值約5分鐘，反覆調(diào)整直到讀值為0%。
7.關(guān)緊Bleed Valve，拔開Sensor，讓Sensor在室溫下測大氣O2濃度約5分鐘，若不為21%，則需校正。
8. SPAN功能校正：通是按↑↓鍵3秒，會(huì)進(jìn)入Program mode，再按↓鍵會(huì)看到LEVEL目錄，按住*鍵以↑鍵選擇目錄3，放開*鍵后按↑鍵至ZERO功能，按住*鍵再以↑↓鍵調(diào)整數(shù)值(↑鍵為增加，↓鍵為減少)，調(diào)整完畢，同時(shí)按↑↓鍵3秒會(huì)到Work mode，觀察O2讀值約5分鐘，反覆調(diào)整直到讀值為21%。
9.關(guān)閉無菌操作臺(tái)UV燈，并開啟無菌操作臺(tái)風(fēng)扇及日光燈。噴酒精于無菌操作臺(tái)平面，并擦拭乾淨(jìng)，以達(dá)到消毒效果。
10.將要使用到的物品，噴酒精消毒，并擦拭乾淨(jìng)，再帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。
11.將細(xì)胞，噴酒精消毒，并擦拭乾淨(jìng)，再帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。
12.將玻璃吸管接再pump的塑膠吸管上。
13.去除細(xì)胞培養(yǎng)液，再加入PBS清洗細(xì)胞，并來回輕輕搖擺幾次。
14.控制組加入5ml H9C2 medium，實(shí)驗(yàn)組則加入5ml No Glucose DMEM。
15.控制組放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
16.實(shí)驗(yàn)組則放入0%氧氣的Calibration Chamber培養(yǎng)24小時(shí)。
17.取實(shí)驗(yàn)組移置到培養(yǎng)箱培養(yǎng)1，3，6小時(shí)。
18.于時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞。

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