標(biāo)題：白血球染色體的分離的步驟-生物顯微鏡技術(shù)
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2011-12-15 23:45:31
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正文:
1.抽血5ml入含抗凝血劑的試管中, 離心2,500rpm, 10min, 以微量吸管吸取白血球?qū)? 置入1.5ml離心管中. 加入600μl red blood cell lysis buffer, 先充份溷合后, 再置平臺頃斜器上緩緩溷合5min, 離心3,000rpm, 5min, 吸除紅色上清液.
2.將1ml已經(jīng)高溫高壓消毒過且已加入5﹪牛血清及含2×10-3mM L-glutamine的MEM組織培養(yǎng)液加入上述離心管中, 充份溷合, 將此含白血球的培養(yǎng)液全部吸出, 置入25cm2的組織培養(yǎng)皿中, 再加入4ml的上述MEM組織培養(yǎng)液, 再加入無菌秋水仙素(colcemid),使最終濃度為10-2μM, 將組織培養(yǎng)皿置含5﹪CO2組織培養(yǎng)箱中, 2hr.
3.將上述培養(yǎng)液全部倒入40ml離心管, 離心5,000rpm, 5min, 倒去上清, 加入低張溶液(配方：0.075M KCl)3ml, 充份溷合, 置37℃, 20min, 再加入固定液(配方：甲醇：冰醋酸＝3：1)6ml, 緩緩充份溷合, 離心5,000rpm, 5min, 倒去上清, 再加入5ml之固定液, 緩緩充份溷合, 離心5,000rpm, 5min, 倒去上清, 再加入5ml之固定液, 緩緩充份溷合, 離心5,000rpm, 5min, 倒去上清, 將白血球液溶在1ml的固定液中.
4.將清潔載玻片置酒精中浸泡, 取出, 將上述白血球液滴1~2滴于載玻片上, 使其風(fēng)乾, 滴上Giemsa染色. 在顯微鏡下400x攝影.
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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