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正文:

植物作物病毒病害血清學(xué)診斷：
    若能制備或購買到各種作物病害的抗血清，則能利用抗血清中的抗體IgG能和原來產(chǎn)生抗體的抗原（病原）發(fā)生專一性反應(yīng)的原理，即能快速簡便偵測到有否病原之存在。
    血清診斷的應(yīng)用，依檢查目的的不同有多元抗體（polyclonal antibody）與單元抗體（monoclonal antibody）之分，多元抗體對偵測有否病原的存在較有利，有如散彈槍，而一般針對未經(jīng)純化材料的血清反應(yīng)偵測方法甚多，較常用的簡述如下：

1.雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（Double diffusion agar assay）：
首先在顯微鏡玻片或培養(yǎng)皿上制備瓊脂凝膠板，凝固后依實(shí)際需要，在瓊脂上挖幾個小孔，孔間保持一定距離，然后將抗原與抗體分別注入小孔中，使它們互相擴(kuò)散，經(jīng)過一段時間后，于抗原與其相應(yīng)抗體接觸處，形成清晰之白色沈淀弧。每一相應(yīng)的抗原抗體僅能形成一條沈淀弧，因此依據(jù)其沈淀弧之?dāng)?shù)目，即可推測抗原液中，有多少種抗原，也可依據(jù)沈淀弧融合或交叉關(guān)系，鑒定兩種抗原是否完全相同，部分相同或完全不同

2.酶連結(jié)抗體法（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）：
酶連結(jié)抗體法又稱酶免疫分析法（enzyme immunoassay, EIA），主要用于免疫診斷病毒感染和其他微生物抗原，敏感度高。其所測定之原理依據(jù)有二點(diǎn)：（1）抗體與部分抗原能吸附于聚乙烯苯（polysytrene）平板小孔內(nèi)，而仍可保持其完整之免疫力；（2）抗原和抗體能與酶結(jié)合形成復(fù)合物，此復(fù)合物也仍保持完整的免疫和酶功能。一般較常應(yīng)用的方法有雙重抗體三明治法（double antibody sandwich assay）和間接免疫吸附法（indirect immunosorbent assay）。以前者為例說明：
      雙重抗體三明法（圖5.4），本法用于檢測和定量抗原。使用本法時，首先把抗血清加入聚乙烯苯平板之小孔內(nèi)，抗血清中之抗體即附著于小孔之內(nèi)層表面，然后加入抗原，若抗原與小孔內(nèi)層之抗體產(chǎn)生專一性反應(yīng)，用清水洗滌以去除游離或未結(jié)合之抗原，抗原仍保留在該處。然后加入酶標(biāo)記之酶─抗體結(jié)合物，此結(jié)合物會結(jié)合于第一次抗體所固定之抗原上，而形成抗體（含酶）─抗原─抗體之三明治，最后加入能與酶反應(yīng)的受質(zhì)。酶反應(yīng)速率與小孔中酶標(biāo)記抗體之含量成正比，受質(zhì)經(jīng)酶而水解，使溶液之顏色起變化，可藉肉眼觀察或分光亮度計(jì)測定。若抗原與第一次吸附性抗體發(fā)生反應(yīng)，則呈陽性反應(yīng)，若抗原與吸附的抗體無反應(yīng)，則因未結(jié)合抗原已被清洗掉，而呈陰性反應(yīng)。

3.單元抗體（Monoclonal antibody）：
所謂單元抗體簡言之是由一個抗原決定基(epitope = antigen determine side )所產(chǎn)生出來的抗體稱為單元抗體，單元抗體用于微量抗原的檢測，從而促進(jìn)了診斷技術(shù)和病毒株鑒定技術(shù)的發(fā)展和準(zhǔn)確性。
通常一個病毒表面就有許多抗原決定基存在，因此想要得到單元抗體，首先要以病毒為抗原免疫注射至白鼠，然后取出脾臟并分離出脾臟細(xì)胞（splen cell）與事先培養(yǎng)準(zhǔn)備好的骨髓腫瘤細(xì)胞（myeloma cell）培養(yǎng)融合，在選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)下，篩選出脾臟細(xì)胞和骨髓腫瘤細(xì)胞相互融合的細(xì)胞，此種細(xì)胞稱為融合瘤（hybridoma）。所得的融合瘤經(jīng)過單一融合瘤細(xì)胞篩選培養(yǎng)，如此所產(chǎn)生出來的抗體就叫單元抗體，又經(jīng)過反應(yīng)鑒定該單元抗體的性質(zhì)后，便可靠繼代培養(yǎng)大規(guī)模地生產(chǎn)高效價(jià)、高度專一化的抗體，用以診檢植物病毒、細(xì)菌和真菌等。具快速和準(zhǔn)確的特點(diǎn)。
上述之骨髓腫瘤細(xì)胞能在體外傳代繁殖，而免疫動物的脾臟細(xì)胞則能產(chǎn)生抗免疫抗原的抗體，兩者融合后的融合瘤細(xì)胞則兼有能產(chǎn)生抗體和體外大量繁殖的特點(diǎn)。