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正文:
1.經(jīng)由輸卵管之置入:
以毛細管(外徑:1 mm,內(nèi)徑:0.75 mm;尖端已被燒圓)吸取擬置入之 1/8 或 2/8 胚〔裸露者或經(jīng)膠囊包埋已裝入透明帶內(nèi)(+ZP)或未包埋者〕,配合少量培養(yǎng)液(約 20 μl),自受胚母兔之輸卵管之繖部(fimbria)緩緩被注入峽部(isthmus)。之后,立即以 20 ml 含 100 I.U./ml 肝素(heparin)之生理食鹽水沖洗手術(shù)部位,用以預(yù)防臟器之粘著,再以 0 號之可消化縫合線縫合傷口。待受胚母兔自麻醉中清醒后,始被送回原畜舍中。
2.經(jīng)由子宮壁之置入:
如唐(1991)所述之方法,利用腹布夾將受胚母兔之兩側(cè)子宮角壁,依置入之胚數(shù)均勻刺穿孔洞。再如前述,經(jīng)由輸卵管置入之方式,將已吸取胚或胚葉細胞之毛細管,沿子宮壁之刺穿孔部位,將之分別置入左或右側(cè)子宮角管腔中。之后,如同前述輸卵管置入胚之步驟,予以縫合傷口。
(四)置入胚或胚葉細胞之回收和檢測:
1.迄置入后 72 小時:
將受胚母兔在各預(yù)定回收之時間內(nèi),予以犧牲或腹腔外科手術(shù)。在取得其生殖道后,自每邊之輸卵管及子宮,分別以 4 和 8 ml 之胚沖洗液沖洗之。子宮部位之沖洗,系經(jīng)由宮管交接處向子宮頸之方向沖洗,沖洗液在子宮頸口回收;輸卵管部位則自輸卵管繖部向?qū)m管交接處沖洗,并在宮管交接處回收;厥罩后w經(jīng)靜置沉淀后,其下層部份被置于
立體顯微鏡下觀察,收集并檢測所回收之胚數(shù)和胚之發(fā)育情況。
2.迄懷孕第 20 天或懷孕終了:
于胚或胚葉細胞被置入后第 20 天,將受胚母兔再度經(jīng)由前述之腹腔外科手術(shù)法,自原手術(shù)部位暴露其生殖道;以檢視左右側(cè)子宮之外觀,并計數(shù)著床之胎兒數(shù)。之后,再如前述方法縫合傷口;待動物清醒后被送回原畜舍飼養(yǎng),以迄懷孕終了。此期間內(nèi),懷孕母兔被審慎照顧,并記錄其產(chǎn)子數(shù)。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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