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正文:
試驗處理:
(一)處理一:微膠囊包埋或未包埋已裝于透明帶內(nèi)(+ZP)之單一和二枚胚葉細胞(1/8 和 2/8 胚)于體內(nèi)和于體外培養(yǎng)至 72 小時之發(fā)育。
1.體外發(fā)育試驗:單一和二枚胚葉細胞(1/8 和 2/8 胚)(+ZP)于體外之發(fā)育率:
(1)試驗設(shè)計:完全逢機設(shè)計。
(2)組 別:1/8 和 2/8 胚(單一和二枚胚葉細胞,+ZP),共計二組。
(3)試驗步驟:取自 3 頭經(jīng)超數(shù)排卵并配種處理之 8-細胞期兔胚(配種后 38 小時),在其被去除外圍之粘液蛋白層和透明帶層并分離胚葉細胞后,被利用顯微注射法將單一或二枚胚葉細胞分別置入已制備之空透明帶內(nèi)(+ZP),使成 1/8 和 2/8 胚;再予以液滴培養(yǎng) 24~72 小時。于培養(yǎng)期間,逐日觀測并記錄各不同胚葉細胞數(shù)組之胚葉細胞分裂數(shù);用以評估 8-細胞期兔胚之 1/8 和 2/8 胚(單一和二枚胚葉細胞,+ZP)于體外培養(yǎng)之發(fā)育率。
2.體內(nèi)發(fā)育試驗:經(jīng)海藻酸鈣膠囊包埋和未包埋之單一枚胚葉細胞(1/8 胚,+ZP)于體內(nèi)迄移置后 72 小時發(fā)育率
(1)試驗設(shè)計:完全逢機設(shè)計。
(2)組 別:膠囊包埋之 1/8 胚組(ME+ZP)和未包埋之對照組(+ZP),共計二組。
(3)試驗步驟:取自 8 頭母兔之 8-細胞期胚,如前試驗之方式,將其個別之胚葉細胞裝入已制備之空透明帶內(nèi)(+ZP)以制成 1/8 胚。隨后逢機將源自同一胚之 1/8 胚,分為兩組。其中之一組經(jīng)海藻酸鈣膠囊包埋(ME+ZP 組)后,即與未包埋之對照組(+ZP),分別經(jīng)由輸卵管之繖部移置入受胚母兔兩側(cè)之輸卵管腔中;并于胚葉細胞被置入后之 12、24、48 和 72 小時,分別將置入之胚葉細胞自受胚母兔生殖道中,回收并鏡檢;用以探討已裝入透明帶內(nèi)之 1/8 胚(單一胚葉細胞)經(jīng)海藻酸鈣膠囊包埋后被移置入受胚母兔之輸卵管內(nèi)迄 72 小時之發(fā)育實貌。于本實驗,同時移置僅以膠囊包埋之裸露胚葉細胞,以評估膠囊結(jié)構(gòu)物于體內(nèi)降解退化之概況。
(二)處理二:兔 8-細胞期胚之單一和二枚胚葉細胞(1/8 和 2/8 胚,+ZP)于體內(nèi)迄懷孕第 20 天或終了之育成率
1.單一和二枚胚葉細胞(1/8 和 2/8 胚,+ZP)之著床率比較:
(1)試驗設(shè)計:完全逢機設(shè)計。
(2)組 別:不同之胚葉細胞數(shù)〔單一和二枚胚葉細胞組 (1/8 和 2/8 胚,+ZP)〕和移置前于體外經(jīng)歷不同培養(yǎng)時間(0 和 24 小時組)各兩組,共計四組。
(3)試驗步驟: 供處理之胚葉細胞系源自 6 頭經(jīng)超數(shù)排卵和配種處理母兔之 8-細胞期胚。如處理一.于體內(nèi)發(fā)育試驗之方式,將源自同一胚之單一和二枚胚葉細胞,分別注入空透明帶內(nèi)制成 1/8 和 2/8 胚。隨后,1/8 和 2/8 胚組被逢機分成二群,分別于胚葉細胞被分離并注入透明帶內(nèi)當時,立即(0 小時組)或再經(jīng)歷體外培養(yǎng) 24 小時后(24 小時組)被移置。每群之 1/8 和 2/8 胚,逢機被置入同一受胚母兔左右兩側(cè)之輸卵管內(nèi),其步驟同前述。而受胚母兔被注射 hCG 之時間較供胚者遲 18 小時。本試驗系用以探討裝入透明帶內(nèi)(+ZP)之不同胚葉細胞數(shù)〔單一(1/8 胚)和二(2/8 胚)枚〕在其被移置前于體外經(jīng)歷之培養(yǎng)時間(0 小時和 24 小時),對置入之胚葉細胞之著床率(置入后第 20 天)以及懷孕終了之育成率之影響。
2.單一和二枚胚葉細胞(1/8 和 2/8 胚,+ZP)之著床率比較:
(1)試驗設(shè)計:完全逢機設(shè)計。
(2)組 別:胚移置前于體外經(jīng)歷之培養(yǎng)時間(0 和 24 小時組)和不同之置入途徑(經(jīng)由輸卵管繖部或子宮腔壁)各兩組,共計四組。
(3)試驗步驟:取自 6 頭經(jīng)超數(shù)排卵處理供胚母兔之 8-細胞期兔胚,其胚葉細胞被如前述之步驟(處理一),每二枚胚葉細胞被注入空透明帶內(nèi)(2/8 胚 +ZP)。隨后,2/8 胚被逢機分成二群,分別于胚葉細胞被分離當時(0 小時組)和于體外培養(yǎng) 24 小時后(24 小時組)被移置。每群之 2/8 胚,再被逢機經(jīng)由輸卵管繖部或子宮角腔壁置入生殖道內(nèi);用以探討胚葉細胞在被移置前于體外培養(yǎng)之時間(0 和 24 小時)和置入生殖道所經(jīng)由之途徑(輸卵管和子宮角腔壁),對置入之 2/8 胚(+ZP)迄置入后第 20 天之著床率以及懷孕終了之育成率之影響。
出自http://www.bjsgyq.com/
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