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正文:
用圖像處理程序處理數(shù)據(jù)。用一個激發(fā)波長下采集的圖像以像素一像索除以另一
波長下采集相應(yīng)的圖像,計算出比值圖像。通過除法運算除以顯像的強度范圍
(例如對于8一比特圖像為0-256的范圍),重新限定數(shù)據(jù)使之表現(xiàn)為分數(shù)形式。
細胞邊緣以外的背景區(qū)一般只有很低的強度,但經(jīng)相除后仍可能得到有效的比
值。因此通常根據(jù)排除低強度背景區(qū)所需的最低限度,將一個二元式“光罩”
應(yīng)用于各比仇圖像。配給和掩蔽的詳細情況在參考文獻102中舉例說明。常用
偽彩色調(diào)色板顯示比值圖像,各種顏色經(jīng)較正后表示不同的pH范圍。
分析兩種校準方法的數(shù)據(jù):如步驟6所述.①已知pH的稀釋染料圖像和②用
甲胺控制已知pH的細胞圖像.用已知pH對計算的比值作圖,制備標準曲線:
可用①中整個區(qū)域的平均比值,也可用②中大盤對象所測得的平均比值。通常
各方法得到的比值比較一致,根據(jù)比值構(gòu)成的標準曲線可確定細胞比值圖像中
每一含熒光位置的pH.
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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