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冰凍切片免疫研究實(shí)驗(yàn)研究型光學(xué)
顯微鏡,鑒定儀器
顯微鏡控制顯色方法
全部抗原抗體反應(yīng)結(jié)束后,即置切片于PBS內(nèi)。可利用
15分鐘的洗滌時(shí)間,配制50毫升酶作用底物溶液
并準(zhǔn)備50毫升醋酸緩沖液和
若干自來(lái)水洗缸,如系冰凍切片,尚需要4%甲醛液,以作
固定用。此外,應(yīng)調(diào)整好顯微鏡的焦距和亮度,顯色過(guò)程應(yīng)
在顯微鏡旁進(jìn)行操作。
由于影響抗原抗體反應(yīng)的因素甚多,因而所有免疫組化
染色技術(shù)均必須有陽(yáng)性和陰性對(duì)照組,否則就不可能正確評(píng)
價(jià)染色的結(jié)果。一般抗體生產(chǎn)公司在出售商品抗體前,已經(jīng)
進(jìn)行過(guò)抗體特異性和敏感性的鑒定。盡管如此,我們?cè)谑褂?/div>
每一種新抗體前,仍有必要重復(fù)檢驗(yàn)該抗體對(duì)正常組織和相
關(guān)抗原陽(yáng)性組織等的染色結(jié)果,以獲得對(duì)該抗體特異性與敏
感性的確切概念?梢园堰@種重復(fù)檢驗(yàn)工作和探討抗體稀釋
度的優(yōu)選試驗(yàn)結(jié)合進(jìn)行。
組織的固定和切片制作過(guò)程對(duì)抗原總有一定影響,因而
充分認(rèn)識(shí)和正確估價(jià)各種不同固定液和切片技術(shù)對(duì)不同組織
包含之各種抗原的影響程度,從而選擇合宜的固定液或切片
方法,以達(dá)到檢測(cè)一定種類(lèi)的組織抗原成分的目的。這是免
疫組化技術(shù)中十分重要的一環(huán)。一般來(lái)說(shuō),冰凍切片因未經(jīng)
任何固定液處理而能較好地保存抗原性,但使用受限,。且不
能作回顧性檢查。除設(shè)備較好的實(shí)驗(yàn)室備有大型一70℃低溫
冰箱儲(chǔ)存冰凍組織能有計(jì)劃地進(jìn)行冰凍切片免疫組化研究
外,很難推廣普及此法。由于近代高敏感的免疫組化染色方
法的發(fā)展,石蠟切片愈益廣泛地被用作免疫組化診斷和研
究。近年來(lái)證實(shí),對(duì)于某些抗原來(lái)說(shuō),石蠟切片甚至優(yōu)于冰
凍切片。
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北京顯微鏡百科
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