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正文:
培養(yǎng)酵母菌-易于培養(yǎng)的典型單細胞檢測
顯微鏡
酵母是一種易于培養(yǎng)的典型單細胞真核
生物,一直作為遺傳學和分
子生物學研究的有力工具,有真核生物中的“大腸桿菌”的美稱。
單倍體酵母細胞基因組為15Mb,含16條大小為200~2200kb的線性
染色體。它的單倍體核酸DNA容量僅為大腸桿菌基因組的3.5倍。
相比較而言,最大的酵母染色體仍然比哺乳動物的染色體的平均大
小小100倍左右。盡管酵母菌基因組很小,但它的許多生物學特性
與真核生物相似。它不僅含有高等真核生物細胞中有膜的亞細胞器
,而且還有細胞骨架。酵母DNA只在核內(nèi)存在,盡管無組蛋白H1,
但染色體DNA的核小體結(jié)構(gòu)與高等真核生物仍十分相似。酵母菌DNA
的轉(zhuǎn)錄由三種不同的RNA聚合酶完成,只有很少的基因出現(xiàn)內(nèi)含子
,mR—NA(由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄)具有真核生物mRNA典型的轉(zhuǎn)錄后修
飾[如5’端加甲基化的嘌呤帽(methyl一G)和3’端加ploy(A)尾]等
特點。它的良好的遺傳背景,為進行真核生物的基因操作提供了大
量的研究工具和可借鑒的經(jīng)驗。
培養(yǎng)酵母菌既簡單、經(jīng)濟,又十分快捷,在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基
中,大約90min的時間即可增殖一代。
支持酵母菌染色體功能的三種基本結(jié)構(gòu)元件已經(jīng)被確認和克隆
,它們分別是復制起點(ARS元件)、著絲粒(CEN元件)和端粒(telom
ere,TEL)。已經(jīng)利用這些克隆化的元件構(gòu)建了酵母人工染色體,
并應用于各種染色體行為的研究。利用這些結(jié)構(gòu)元件,再加上克隆
化的酵母菌選擇標記與大腸桿菌載體融合構(gòu)建成穿梭載體,能分別
在大腸桿菌和酵母菌中自主復制并穩(wěn)定存在。
大多數(shù)酵母載體都是能穿梭于酵母和細菌之間的穿梭載體。根
據(jù)不同用途,可分為克隆載體、表達載體、轉(zhuǎn)導載體和用于誘變的
載體。根據(jù)復制方式,酵母載體也可分為兩類。一類是整合載體,
這種載體在酵母中不能自我復制,只能通過同源重組整合到染色體
中而得以保存。這類載體的優(yōu)點是某個基因一旦被克隆和整合之后
,將隨染色體DNA而分離。因此該基因在細胞分裂時會更穩(wěn)定。另
一類載體(它包括酵母著絲點序列),一般在克隆時作為一個CEN/A
RS盒,這類載體同時具有自我復制能力并且在細
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