冷凍切片機(jī)簡(jiǎn)易操作步驟
1. 將標(biāo)本臺(tái)木(鋁材質(zhì))置于快速冷凍臺(tái)上降溫。
2. 待標(biāo)本臺(tái)木降溫后(約10-15分鐘),由快速冷凍臺(tái)取出,平置于桌面。滴一滴冷凍包埋劑(cryo tissue embedding compound)于鋁質(zhì)標(biāo)本臺(tái)朝上之一端。然后將新鮮材料切成約3-5 mm長(zhǎng)或?qū)捴笮,并將材料埋入冷凍包埋劑中。再?-3滴于標(biāo)本上使之完全包埋,并立即將標(biāo)本臺(tái)木放回快速冷凍臺(tái)降溫。包埋時(shí),要求動(dòng)作干凈,利落,迅速,并切記勿使標(biāo)本周?chē)a(chǎn)生氣泡。
3. 約3-5分鐘后冷凍包埋劑即完全凝結(jié),即可將標(biāo)本臺(tái)木裝架在切片機(jī)之標(biāo)本固定夾上。設(shè)定切片角度,切片厚度及操作箱溫度,進(jìn)行冷凍切片。
4. 調(diào)整切片刀上方壓克力制反卷曲裝置(anti-roll device)之位置及間隙,使其前緣與切片刀之刀刃平行。
5. 進(jìn)行單片切片,若反卷裝置調(diào)整適當(dāng),則切片應(yīng)如三明治狀?yuàn)A在切片刀與反卷曲壓克力裝置之間。
6. 將反卷曲壓克力裝置向上移開(kāi),取常溫之清潔玻片,使之與切片靠近貼合。低溫之切片遇常溫之玻片即展平并融解。切片需暫存放于無(wú)灰塵的切片盒中晾干,并使標(biāo)本與載玻片充分黏合,再進(jìn)行下一階段的染色,以避免材料中途脫落。
☆ 注:各種
生物標(biāo)本之質(zhì)地差異頗大,冷凍切片之成敗關(guān)鍵在于操作箱的溫度,一般而言,植物材料所需的溫度較高,可由-17℃~-18℃開(kāi)始試切,
視結(jié)果再作溫度調(diào)整。動(dòng)物標(biāo)本則可忍受較低的溫度,尤其含脂肪量 高的標(biāo)本在-20℃~-30℃之間為適當(dāng)?shù)臏囟。整體而言,刀口的溫度
-10℃至-20℃之間,可以滿(mǎn)足約80%標(biāo)本的溫度需求。
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