標(biāo)題：PcR法以其快速、靈敏特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用在轉(zhuǎn)化子的篩選
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2017-2-26 21:17:55
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正文:
PcR法以其快速、靈敏特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用在轉(zhuǎn)化子的篩選
PCR擴(kuò)增的優(yōu)化
特異性、忠實性和有效性是檢測PCR擴(kuò)增的三個標(biāo)準(zhǔn)。三者有時
不可兼得，高特異性的反應(yīng)條件與高產(chǎn)量的反應(yīng)條件并不一致，高
保真的擴(kuò)增會導(dǎo)致低產(chǎn)率。因此應(yīng)該
根據(jù)實驗?zāi)康膬?yōu)化反應(yīng)條件。
PCR擴(kuò)增的特異性主要是由引物的特異性和循環(huán)參數(shù)來決定的
。循環(huán)參數(shù)中最主要的是退火溫度和退火時間。提高退火溫度和降
低退火時間能有效地提高反應(yīng)的特異性。減少延伸時間、減少ngE
酶量、減少循環(huán)次數(shù)能提高特異性。
采用高保真的了kgE可以降低反應(yīng)產(chǎn)物的變異，但其擴(kuò)增效率
有可能降低。
由于制備模板DNA分子時，會產(chǎn)生一定量的單鏈DNA分子，這些
單鏈非靶DNA分子在低溫下能與引物退火，隨后的擴(kuò)增反應(yīng)能產(chǎn)生
非特異性擴(kuò)增。
PcR法以其快速、靈敏的特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用在轉(zhuǎn)化子的篩選上。傳
統(tǒng)的篩選轉(zhuǎn)化菌落需要提取質(zhì)粒后進(jìn)行PCR檢測，考慮到PCR擴(kuò)增對
模板的純度要求不高，因此可以直接用菌落擴(kuò)增，而不用先提取質(zhì)
粒后再擴(kuò)增篩選。PCR引物既可以是插入基因的特異引物，也可以
是載體多克隆位點(diǎn)兩端的引物(如T7、T3、SP6、M13等)。采用基因
特異引物可直接篩選出目的克隆，而用多克隆位點(diǎn)兩端的引物可以
得到插入片段長度的信息。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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