標題：SEC實驗的層析柱選擇-細胞提取液測定各組分
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2017-3-11 2:40:40
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正文:
SEC實驗的層析柱選擇-細胞提取液測定各組分
常規(guī)SEC的層析柱選擇
進行常規(guī)SEC，必須選擇適當?shù)目罩�。典型柱的大小應是�?nèi)徑1
～1．6cm，長度為50～10℃m。附件包括填料儲器，此儲器可裝柱
一次完成。為進行精確的溫度調控或在較冷的室溫下操作，層析柱
的外面可套上溫度調節(jié)套。然而，由于實驗目的的不同，常在室溫
下操作，需加人適當?shù)臍⒕鷦�。短時間(10～15min)的體積排阻高
效液相層析(SE-HPLC)不應在低溫下進行。確定峰值
洗脫時，每一蛋白峰的洗脫體積，要以標準蛋白柱的洗脫體積
作為標準，即時測定，通常用紫外監(jiān)視器測定210～220nm或280 nm
處的光吸收值。然而，對于細胞提取液，利用部分收集器收集到的
洗脫液，逐一測定各組分來確定目的蛋白的洗脫體積，這些測定包
括電泳、免疫印跡法、酶活性的測定和配體結合。為便于每一組分
的測定，這些組分要有足夠的量，因此應將每一部分最小化，以減
少估計洗脫體積時出現(xiàn)的誤差。例如，0．05～o．2 m1的組分洗出
體積適合用SE-HPLC柱，將有5～10ml的內(nèi)水體積，而對于常規(guī)柱，
1 m1的組分洗出體積，就可將洗脫體積(Vre)的誤差減少到1％，此
時的內(nèi)水體積約有l(wèi)OOml。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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