標(biāo)題：蔗糖密度梯度區(qū)帶沉淀法測(cè)定分子質(zhì)量分析顯微鏡
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作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2017-3-11 22:03:16
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正文:
蔗糖密度梯度區(qū)帶沉淀法測(cè)定分子質(zhì)量分析顯微鏡
蔗糖密度梯度區(qū)帶沉淀法測(cè)定分子質(zhì)量
蔗糖密度梯度區(qū)帶離心法分離大分子物質(zhì)，是根據(jù)待分離的物
質(zhì)在離心場(chǎng)中的沉降速度不同而設(shè)計(jì)的。由于大分子物質(zhì)在離心場(chǎng)
中遷移速度的差異而有各自的沉降系數(shù)，反映出它的質(zhì)量、形狀、
密度和水合狀態(tài)。因而，進(jìn)行適當(dāng)控制和測(cè)定其特有體積(大分子
物質(zhì)密度的一個(gè)測(cè)量指標(biāo))，即可估計(jì)出相對(duì)分子質(zhì)量，也可根據(jù)
得出的Stokes半徑(Rs)計(jì)算出分子質(zhì)量。
不變性條件下分離得到多蛋白復(fù)合體或同聚體蛋白的寡聚體，
沉淀分析可測(cè)定它們的分子質(zhì)量。沉降法尤其適用于測(cè)定球狀水溶
性蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量，有去污劑存在時(shí)整合膜蛋白分子質(zhì)量的測(cè)定
也可用該方法，此時(shí)由于受到一定限制僅可測(cè)出分子質(zhì)量的近似值
。重要的是，如果測(cè)定出不同種蛋白質(zhì)或蛋白復(fù)合體(如細(xì)胞裂解
液、組織勻漿液、細(xì)胞上清液、血清)的特有性質(zhì)(如酶活性、抗體
結(jié)合能力或吸光度)，那么也可用這種方法分析。沉降以勻速進(jìn)行
時(shí)，蔗糖梯度可以抵抗分子散射和機(jī)械干擾，使大分子物質(zhì)穩(wěn)定沉
淀。
傳統(tǒng)的沉降實(shí)驗(yàn)對(duì)蛋白復(fù)合體(尤其是有去污劑存在時(shí)的整合
膜蛋白)進(jìn)行大致分離，僅能粗略估計(jì)分子質(zhì)量，但對(duì)于球狀水溶
性蛋白質(zhì)，用這種方法得出的分子質(zhì)量與實(shí)際分子質(zhì)量接近。區(qū)帶
沉淀主要用于蛋白質(zhì)的分析，該種方法也適用于包括病毒和小分子
核酸等核蛋白復(fù)合體相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定。
利用區(qū)帶離心對(duì)樣品(如細(xì)胞裂解液)進(jìn)行初步分離，首先將樣
品通過蔗糖梯度超速離心，再對(duì)梯度液洗脫分為若干部分。因而區(qū)
帶離心受到不同區(qū)帶內(nèi)的蛋白質(zhì)測(cè)定方法和蛋白質(zhì)自身的沉降系數(shù)
以及相對(duì)分子量計(jì)算方法的限制。要得到有意義的結(jié)果，必須設(shè)計(jì)
和制定出相應(yīng)的方法。此外，還要考慮分離范圍和分辨率，以便測(cè)
定梯度的斜率、超速離心用的試管的大小和超速離心的長短。最后
，必須考慮梯度形成和分離方法的多樣性，選擇達(dá)到目的的最佳方
法和(或)現(xiàn)有設(shè)備。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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