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正文:
作為活細(xì)胞影像工具的GFP
水母(Aequorea victoria)綠色熒光蛋白(GFP)已經(jīng)成為研究細(xì)
胞和發(fā)育生物學(xué)很有價(jià)值的一種工具。緊湊的桶狀結(jié)構(gòu)和3一縮氨
酸發(fā)色團(tuán)是形成功能熒光蛋白所必需的,但是它具有很強(qiáng)的延展性
,可發(fā)生氨基酸替代。因此,發(fā)色團(tuán)內(nèi)部或周圍隨機(jī)和直接突變會(huì)
改變激發(fā)和發(fā)射光譜,并產(chǎn)生較亮的分子。WtGFP的吸收峰為397nm
和475nm。504 nlTl是另外一個(gè)綠色的激發(fā)峰值。65位絲氨酸的替
代使WtGFP的主要和次要吸收峰變成了一個(gè)單一的489nm的峰,但仍
為綠色熒光。這類分子的普遍形態(tài)EGFP,即加強(qiáng)的GFP通常還有其
他氨基酸替代和密碼子置換,可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞高效表達(dá)。T203Y
以及$65G突變可使吸收和發(fā)射波峰發(fā)生紅向移動(dòng),產(chǎn)生黃色熒光蛋
白(EYFP)。發(fā)色團(tuán)內(nèi)Y66若被組氨酸或色氨酸取代,可使吸收和發(fā)
射峰值發(fā)生藍(lán)向移動(dòng),分別產(chǎn)生藍(lán)色和藍(lán)綠色熒光蛋白(EBFP和ECP
F)。
水母突變體的光譜未發(fā)生紅移,沒有超出黃色蛋白的范圍,但
是其他海洋生物的熒光蛋白延伸到了紅色熒光區(qū)。例如,從異輻海
葵(Hetractis crispa)提出的HcRed蛋白和從珊瑚(Discosoma)克隆
出的DsRed蛋白。隨著緩慢的繁殖這些蛋白質(zhì)首先疲軟,然后在低
濃度下發(fā)生自我交結(jié),但是氨基酸的替代可以減少繁殖的次數(shù),并
破壞四聚體產(chǎn)生二聚體甚至單體。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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