葉片透化法(2)北京
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一、固定
取一片健康或感病之葉片,以FPA固定液直接進(jìn)行固定,必須輕滴,蓋過整片組織。固定24 hrs后水洗。
二、透化
利用飽和之水化氯醛進(jìn)行透化24 hrs以上,依葉片組織不同,需透化之天數(shù)從數(shù)天至一個月,但透化過久較不易染色?稍谛瓋(nèi)進(jìn)行透化,透化液需蓋滿整個組織,經(jīng)抽氣30 min后靜置。若葉片很厚色素很多,則需更換透化液,透化液可重復(fù)利用。染色前先多次以水完全洗去透化液,才能接受下一階段之染色。
三、染色
(1)以0.1%玫瑰紅(Rose bengal)水溶液染色一分鐘后水洗封片;
(2)以甲苯胺藍(lán)O直接染色10-15 min,水洗封片;
(3)以(2)染色后水洗,再以(1)染色20秒,水洗封片。
葉片透化法前需要準(zhǔn)備器材及消耗品
植物材料:葉片 如桂花葉
酒精
5%NaOH
加熱器
chloral hydrate
蒸餾水
50%酒精
0.5% safranin、95%酒精、100%酒精、二甲苯
封片膠
毛筆或小紙片
明視野顯微鏡*1
解剖顯微鏡*1
四、用途
1. 可用以觀察葉片上氣孔之分布、表皮細(xì)胞之排列及葉脈之走向。
2. 可用以觀察病原菌入侵葉片后菌絲之分布及走向。
五、藥品配制
※FPA固定液:福爾馬林5 ml、丙酸5 ml、50%酒精90 ml。
※透化液:水化氯醛(Chloralhydrate) 250 g/100 ml 無菌水。
※甲苯胺藍(lán)O(Toluidine blue O):0.05%甲苯胺藍(lán)O,以0.05 M枸緣酸緩沖液配制。
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