信息分類:金相文章
作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2011-10-28 23:57:47
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熒光顯微鏡檢測(cè)診斷膠原性疾病-斑狼滄抗核抗體(ANA)操作
測(cè)試方法:
利用間接性免疫螢光法(Indirect immunofluoresence method)測(cè)定抗核抗體。用HEP-2細(xì)胞做核基質(zhì),螢光劑(FITC)做為螢光染料。
血清樣品(一級(jí)抗體)滴在含有HEP-2培養(yǎng)細(xì)胞之玻片上(抗原)
↓抗原-抗體反應(yīng)
滴入加羊抗人體免疫球蛋白結(jié)合FITC(二級(jí)抗體)(Fluroescein Isothiocyanate)
↓
螢光顯微鏡觀察判讀(200X)
使用螢光顯微鏡觀察判讀(200X)
【注意】
玻片製成后應(yīng)盡快判讀。若無(wú)法馬上判讀,可先將玻片存放于4℃
之黑暗處,24小時(shí)內(nèi)判讀。
九、結(jié)果判定:
(-):細(xì)胞核內(nèi)無(wú)特異性螢光。
(±):細(xì)胞核內(nèi)僅見輕微之特異性螢光。
(+):細(xì)胞核內(nèi)全部或局部可見特異性螢光。
(++):細(xì)胞核內(nèi)全部或局部可見顯著的特異性螢光。
若血清樣品于20X稀釋時(shí)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)(+,++),則可視為抗核抗體陽(yáng)性。陽(yáng)性血
清可能出現(xiàn)下列幾種染色型態(tài):
均質(zhì)型(homogeneous)
擴(kuò)散型(diffuse)
斑點(diǎn)型(speckled)
核仁型(nucleolar)
不連續(xù)斑點(diǎn)型(discrete speckled)
溷合型
螢光顯微鏡之BV系統(tǒng)較UV系統(tǒng)之敏感度高,容易判讀結(jié)果。
十、判讀:
1、利用Poly Titer 儀器判讀,操作步驟請(qǐng)參考『Poly Titer系統(tǒng)』。
2、利用CCD可作影像輸出,操作步驟請(qǐng)參考『CCD影像擷取系統(tǒng)』。
十一、注意事項(xiàng):
1、盡可能使用新鮮的血清。
2、血清樣品避免冷藏再解凍,否則會(huì)降低抗體效價(jià)及產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。
3、勿接觸玻片表面之基質(zhì)細(xì)胞,并勿直接以吸水紙吸乾細(xì)胞之水分。
4、反應(yīng)必須在濕潤(rùn)箱中進(jìn)行。
5、不可使用乳糜血清,否則會(huì)導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。
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