顯微鏡,金相顯微鏡,生物顯微鏡,北京地區(qū)專業(yè)供應(yīng)商

點擊查看產(chǎn)品參數(shù)和報價--丨--

正文:

解剖顯微鏡干冰法制備永久切片步驟
1. 壓片技術(shù)
   壓片技術(shù)是使細(xì)胞組織解離成主要細(xì)胞群或使小細(xì)胞群散開成單一個體，有助于對個體細(xì)胞和其組織結(jié)構(gòu)的研究。在高等植物中僅發(fā)現(xiàn)一種組織其細(xì)胞呈一致的零散單位，只是借著壓碎細(xì)胞便使之分開。這種細(xì)胞就是花粉母細(xì)胞或一團花粉囊中的花粉。其它組織在作成抹片之前必須先由試劑處理，此試劑將先分解中膠層以使細(xì)胞單離。
 壓片組織的方法比石臘切片技術(shù)具有下列優(yōu)點：
     A. 較快速獲得結(jié)果。
     B. 在石臘切片技術(shù)中個體被切開成兩個或更多的切片，而壓片技術(shù)則
        保持主體細(xì)胞在一起。
     C. 染色體數(shù)可更容易被算出來，且染色體結(jié)構(gòu)更能明白的顯示。
  
   目前壓片技術(shù)為染色體觀察常用的方法，因為它不易將細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)染色而造成觀察的干擾。

2. 常用于壓片技術(shù)的染色方法有兩種：
   A. Aceto-carmine染色法
   B. Feulgen染DNA法
3. 以干冰法制備永久切片的流程：
   取蠶豆（Vicia fuba），玉米（Zea mays），豌豆（Pisum sativum）或洋蔥（Allium cepa）之根尖制備抹片，進(jìn)行有絲分裂周期之觀察，并作成永久切片。
制片流程
1. 拔取兩株幼苗，在燒杯中用水沖洗根部直到去除黏附的蛭石粒子。切下末端1-1.5 cm并且把根尖浸在醋酸和酒精1：3的溶液中抽真空固定20分鐘。
2. 由固定液中取出并以蒸餾水淋洗10分鐘。
3. 傾倒去水，再加室溫之1 N HCl 浸泡2分鐘。
4. 傾倒去冷的HCl，并把玻璃瓶子放在60℃的水浴鍋中的架子上，加入1 N HCl 60℃作用10分鐘，以使根組織軟化。
5. 傾倒出熱的HCl并且加入蒸餾水處理5分鐘。
6. 輕輕倒出水且加入Feulgen試劑到足以蓋過根部即可，在暗處作用至少30分鐘。
7. 輕輕倒出Feulgen試劑放入干凈的容器中，然后用水淋洗3次。
8. 取一根放在干凈的載玻片上，加一滴45％醋酸。用鑷子夾住根基部且用解剖針或刀切下根尖端1-2 mm。用吸水紙拭去所有45％醋酸，只留一小滴在根部尖端四周。
9. 以一只平底玻璃棒慢慢輕敲根部尖端直到細(xì)胞完全搗碎。假如經(jīng)適當(dāng)搗碎，當(dāng)提起玻璃棒時，搗碎的組織將會呈圣代冰淇淋狀的小丘。使用圓玻棒其直徑約3-4 mm，其兩端以高溫之火加溫至開始熔化時，在一冷的平面玻璃上輕壓，使其表面呈現(xiàn)平滑，即可作為搗碎玻璃棒。搗碎根組織時只宜將玻璃棒作上下敲擊，不宜作如磨墨之順時針方向之圓形動作磨碎。
10. 加一小滴45％的醋酸慢慢的輕輕的劃圓直到細(xì)胞擴散開來。把載玻片放
   在幾張紙巾之上，再把蓋玻片斜放在上，且緩緩以拇指使力壓蓋玻片。
11. 擦凈載玻片底部并且在顯微鏡下鏡檢。一直修改壓片的技術(shù)直到滿意的
   結(jié)果出現(xiàn)即可繼續(xù)下一步驟以干冰法制作永久玻片。染色時間可以增減調(diào)整。