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正文:

抽提動(dòng)物細(xì)胞的DNA的方法和步驟？-生物顯微鏡廠家！

材    料：

液態(tài)氮

Digestion buffer

[配方]100mM NaCl          10mM Tris.Cl,pH8

25mM EDTA, pH8      0.5﹪sodium dodecyl sulfate

※      0.1mglml proteinase K(proteinase K必須在每次使用前才加入以保有效)

4℃ Phosphate-buffered saline (PBS)

[配方]10X儲(chǔ)存液：

每公升中含--80g NaCl              2g KCl

11.5g Na2HPO4.7H2O     2g KH2PO4

使用液(工作液)：

pH7.3--137mM NaCl       2.7mM KCl

4.3mM Na2HPO4.7H2O       1.4mM KH2PO4

25：24：1 Phenol/Chloroform/isoamyl alcohol

7.5M ammonium acetate

100﹪及70﹪ethanol

TE brffer pH8

方    法：

1.     將動(dòng)物組織切下, 迅速放入液態(tài)氮中, 待組織凍硬, 立即磨成粉狀.

2.     每100mg組織加入1.2ml digestion buffer. (若係用組織培養(yǎng)細(xì)胞, 則離心1000rpm, 5min, 沉淀細(xì)胞, 再以PBS洗細(xì)胞二次, 離心除去PBS, 再將細(xì)胞溶在digestion buffer中, buffer的用量為每108細(xì)胞用1ml).

3.     將組織或細(xì)胞放在digestion buffer中, 在50℃, 振盪12hr.

4.     以等體積的Phenol/Chloroform/isoamyl alcohol提取DNA.

5.     離心2,500rpm, 10min, 上清液中為DNA. (若中間層的白色物質(zhì)量多, 可重複此提純程序)

6.     將上清一轉(zhuǎn)至另一離心管中, 加入1/2倍體積量之7.5M ammonium acetate, 及上清液量2倍之100﹪ethanol, DNA當(dāng)很快析出. 再以離心2,500rpm, 2min, 沉淀DNA, 倒去上清.

7.     用70﹪ethanol洗DNA, 以去除鹽分及phenol, 倒去酒精, 使DNA乾燥.

8.     將DNA溶入適量TE中, 可將離心管放65℃并緩緩振盪, 以加速溶解.

9.     將DNA保存在-20℃(以1mg/ml為佳).

預(yù)期結(jié)果：每克動(dòng)物組織或每109個(gè)細(xì)胞約可得2mg DNA.

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科