標(biāo)本之製作
(一) 玻片及蓋玻片 (Slide and Coverslips)
玻片及蓋玻片品質(zhì)必須很好而沒有螢光,玻片厚度 ≦1.0mm 者便可用,玻片之清洗,必須以中性清潔劑洗淨(jìng),再浸于含有 3%HCl 之乙醇 12~24 小時,然后再儲存于純酒精。要用時,以清潔紗布擦淨(jìng)或火焰烘乾。用完后可浸于水中,移去封埋物,再經(jīng)清潔劑及重酪酸-硫酸溷合物*處理。
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粗製重酪酸鉀 300 gm
20% 硫酸水溶液 3000 ml
使用琺瑯質(zhì)或陶質(zhì)容器,先放入 20% 硫酸水溶液,然后緩緩加入粗製重酪酸鉀,以玻璃棒攪拌,此時會發(fā)熱,俟冷卻后使用。
目前已有處理好的玻片出售,使用上甚為方便。
(二) 組織切片 (Tissue Sections)
組織切片愈薄愈好 (4μ),如果切片太厚,則可能自體及非特異螢光增加,目前都用冷凍切片機 (Cryostat) 來切,冷凍切片機包括冰凍柜 (Refrigerated Cabinet),溫度在 0℃~-30℃ 之間,切片機 (Microtome) 放在裡面,將組織在 -20℃ 冰凍 10 分鐘,就可以切,切下之薄片,以玻片捺下后在室溫急速乾燥。製備好之切片必須儘可能馬上固定及染色。如果切片必須儲放短時間 ( 約 1 週 ),則固定后密封儲放于 -70℃,要染色時,切片必需回溫到室溫方啟開。
(三) 細胞培養(yǎng)法 (Cell Culture Preparation)
細胞培養(yǎng)法一般用蓋玻片在組織培養(yǎng)盤 ( 例如 24 孔 )或培養(yǎng)在玻璃片 (Chamber Slide) 上,再和普通接種病毒一樣,接種可疑病材乳劑,培養(yǎng)數(shù)天,取出,乾燥、固定、水洗,再用標(biāo)示抗體染色以檢查特異螢光。
(四) 涂抹法或捺壓法 (Smear and Impression Preparation)
所用玻片需很薄,一般用蓋玻片代用,將所要檢查之病材,如血液、組織液或其他病材,在玻片上涂抹或捺壓,涂抹或捺壓片在室溫用吹風(fēng)機或電風(fēng)扇 ( 以冷風(fēng)吹乾 ),以甲醇或丙酮固定,放于密封標(biāo)本箱于 -20℃ 備染或馬上染色。
(五) 固定 (Fixation)
除了使組織固定于玻片外,另一方面亦可助抗原-抗體複合物之形成,例如把脂質(zhì)溶解,使抗體抗原較易反應(yīng)。一般用 100% Methanol 在室溫作用 2 分鐘,或丙酮于 -20℃ 下 10 分鐘來固定微
生物抗原及病毒。
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